皮膚模型的構(gòu)建及在檢測(cè)藥物化妝品中的應(yīng)用.pdf

1、皮膚模型建立的方法至今已有30余年的歷史，伴隨組織工程技術(shù)的發(fā)展，建立皮膚模型已從單層表皮模型到復(fù)層皮膚替代物日趨成熟。國(guó)內(nèi)對(duì)于皮膚模型的研究尚處于起步階段，使用中國(guó)人皮膚建立替代模型，是當(dāng)前的研究重點(diǎn)。皮膚模型按照復(fù)雜程度分為上表皮模型、真皮模型和表皮-真皮（復(fù)層皮膚）模型3種。這些體外替代模型對(duì)于體內(nèi)、體外的毒理學(xué)評(píng)價(jià)具有重要意義。本課題旨在使用原代皮膚角質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞構(gòu)建皮膚模型。首先，要選擇合適生物材料作支架，并配制合適化學(xué)

2、成分的培養(yǎng)基;繼而，取人體正常無病變組織，進(jìn)行原代角質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng);最后，待兩種細(xì)胞達(dá)到最佳生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，接種嵌入式培養(yǎng)皿中進(jìn)行氣液培養(yǎng)，以形成多層的、高度分化的器官性組織模型。進(jìn)行模型驗(yàn)證首先要進(jìn)行HE切片、免疫組化試驗(yàn)以觀察模型生長(zhǎng)狀態(tài);第二要使用已構(gòu)建好的皮膚模型進(jìn)行皮膚毒性檢測(cè)，本研究受試物為歐洲替代實(shí)驗(yàn)確認(rèn)中心規(guī)定的用于皮膚刺激性的物質(zhì)中選取11種化學(xué)品，使用MTT法以及ELISA法檢測(cè)皮膚模型IL-lα因子的釋放

3、量，以確定該模型的穩(wěn)定性、敏感性和準(zhǔn)確性，逐步建立皮膚毒性動(dòng)物替代試驗(yàn)的方法和平臺(tái);最后，進(jìn)行皮膚模型毒性評(píng)價(jià)的應(yīng)用，選取藥物化妝品8種，以評(píng)價(jià)該體系為基礎(chǔ)，檢測(cè)其毒性。
　　 獲得主要結(jié)果包括:(1)成功構(gòu)建了2株不同年齡的成纖維細(xì)胞系;(2)使用鼠尾膠原構(gòu)建了膠原支架;(3)構(gòu)建了皮膚表皮模型;(4)HE染色和免疫組化試驗(yàn)觀察模型與正常皮膚表皮相似;(5)模型驗(yàn)證過程中，與動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)行對(duì)比，準(zhǔn)確率達(dá)70％;(6)在藥物化妝品