熒光定量PCR檢測(cè)飼料中牛羊源性成分方法的建立.pdf

1、瘋牛病對(duì)全球的畜牧養(yǎng)殖業(yè)以及人類(lèi)健康產(chǎn)生了巨大的危害,流行病學(xué)調(diào)查證明瘋牛病、羊癢病都是由朊蛋白(prion)引起,并通過(guò)食物鏈傳染而傳播,并與人新型克-雅氏癥的發(fā)病有關(guān)。研究證明,用患有瘋牛病和羊癢病的牛、羊等動(dòng)物的肉和骨頭制成的肉骨粉喂養(yǎng)動(dòng)物會(huì)導(dǎo)致瘋牛病和羊搔癢病的傳播,因此包括我國(guó)在內(nèi)的世界各國(guó)嚴(yán)令禁止使用反芻動(dòng)物蛋白飼料飼喂牛、羊等動(dòng)物,由此也產(chǎn)生了對(duì)飼料中是否含牛、羊源性成分進(jìn)行檢測(cè)的必要。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于飼料中反芻動(dòng)物源性成分

2、的檢測(cè)方法的報(bào)道主要有顯微鏡檢、紅外光譜、普通PCR、ELISA等,但這些方法存在檢測(cè)量小、易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果、要求檢驗(yàn)人員有豐富的操作經(jīng)驗(yàn)等缺點(diǎn),需要建立一種更快速、準(zhǔn)確和經(jīng)濟(jì)的方法,而熒光定量PCR法正是一種可以滿(mǎn)足這些要求的方法。本論文從以下三個(gè)方面對(duì)這一方法進(jìn)行了研究:1飼料中牛、羊成分DNA的提取及凈化條件2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)條件3方法的特異性、靈敏度及穩(wěn)定性,通過(guò)解決了樣品DNA提取的時(shí)間、溫度、試劑、特異性引物及探針