飼料中動物源性成分PCR檢測方法的建立和應(yīng)用.pdf

1、為進(jìn)一步完善現(xiàn)有動物源性飼料檢測體系，本研究建立了飼料中動物源性成分的PCR檢測方法；并且通過實地調(diào)研、隨機(jī)抽樣初步了解我國奶業(yè)主產(chǎn)區(qū)動物源性飼料的使用情況。 本論文從以下三個方面進(jìn)行研究： 一、我國部分地區(qū)動物源性飼料使用情況的初步調(diào)研： 河北、黑龍江、內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市的調(diào)研結(jié)果顯示，201戶養(yǎng)殖戶中有9戶養(yǎng)殖戶在奶牛飼料中添加肉骨粉、魚粉等動物源性飼料，占調(diào)查總數(shù)的4.48％。 二、飼料中動物源性成

2、分PCR檢測方法的建立本研究使用Qiagen公司的組織DNA提取試劑盒提取核酸。根據(jù)牛、羊、豬、雞、魚以及馬的mtDNA的16S rRNA基因序列選用了一對通用引物，初步判斷樣品中是否含有動物源性成分；牛、羊引物選用已報道的特異性引物；根據(jù)豬、雞線粒體DNA的ATPase8區(qū)特異保守區(qū)、魚線粒體DNA 16S rRNA序列設(shè)計并篩選了豬源性特異引物Pig9044/9066F/Pig9294/9314R、雞源性特異引物Chicken912

3、9/9151F/Chicken9305/9327R和魚源性特異引物NC_Fish2480/2501F/NC_Fish2565/2586R。 PCR檢測結(jié)果表明，牛、羊、豬、雞、魚引物特異性好，擴(kuò)增的目的片段大小分別為271bp、275bp、271bp、199bp、107bp；可以檢出0.1％的牛、羊、豬、雞、魚源性成分。同時，使用氯仿和0.5％次氯酸鈉溶液對檢出牛源性成分的樣品進(jìn)行處理，最終實現(xiàn)肉骨粉和奶粉的區(qū)分。 三、