熟肉制品中動物源性成分熒光定量PCR檢測方法的建立和應用.pdf

1、隨著社會、經濟的發(fā)展和人民生活水平的提高，肉類制品的需求量迅速增加，由于生產成本的差異，造成肉類產品的價格高低不一，為不法商販以低價肉冒充高價肉獲取不法利益創(chuàng)造了條件，肉制品摻假、造假事件頻繁發(fā)生。當消費者購買或食用了摻假或摻雜的肉類制品后，不僅會造成經濟損失，還有可能對消費者身體健康造成損害，出現食物中毒、民族糾紛等事件，對社會穩(wěn)定產生一定的危害性。肉類制品的摻假摻雜主要是在一種價位較高的肉類中摻入一定數量的外觀類似的其它低價位肉類，

2、通過人為加入色素、香料等禁用的添加劑進行調味、調色處理后，冒充高價位肉類。摻假摻雜的肉制品較難分辨，特別是經過熟制加工的肉制品更難進行分辨。早期的一些檢驗技術已經無法滿足現代檢測需要，部分研究也只是針對未曾加工的生肉制品，在經過高溫高壓的熟肉制品的摻假摻雜檢測上，原有的檢測方法分辨能力更差。因此迫切需要新的檢測技術和標準，為相關監(jiān)管部門提供評價和執(zhí)法的依據。
　　本研究引用國標及部分成熟方法中以線粒體DNA設計的探針及引物序列，以

3、線粒體DNA作為模板應用于動物源性成分鑒別檢測。試驗過程中，采用成品的核酸提取試劑盒和PCR反應體系試劑盒，在試劑盒提供的方法上，進一步對核酸提取和反應體系進行優(yōu)化。核酸提取前，對樣品進行油脂的去除，液氮冷凍條件下研磨充分粉碎細胞及蛋白質，再用進行核酸提取。與直接提取的DNA相比較，蒸煮制品經過除去脂溶性雜質前后DNA純度和總量相比均無顯著性差異，生肉制品經過除去脂溶性雜質前后DNA純度無顯著性差異，總量相比具有顯著性差異，煎炸制品和燒

4、烤制品經過除去脂溶性雜質前后相比均具有顯著性差異，進行油脂去除和液氮冷凍研磨的核酸提取物純度與含量更利于實驗。同時對探針、引物、模板用量和退火溫度進行優(yōu)化，確定多模板通用的反應體系和反應參數，實驗表明使用的引物和探針具有很好的檢測特異性，對DNA水平和不同熟制方式的混合肉樣靈敏度分析，得出豬、雞 DNA混樣的檢測下限定為0.1％，鴨DNA混樣的檢測下限為0.5%，混合肉樣蒸煮條件下豬肉體系檢測下限定為0.1%，雞肉體系檢測下限定為0.5

5、%，鴨肉體系檢測下限定為0.5%；混合肉樣煎炸條件下豬肉體系檢測下限定為0.5%，雞肉體系檢測下限定為0.5%，鴨肉體系檢測下限定為0.5%；混合肉樣燒烤條件下豬肉體系檢測下限定為0.5%，雞肉體系檢測下限定為0.5%，鴨肉體系檢測下限定為0.5%。按照以上確定的檢測體系，本研究建立的各檢測體系對實際肉樣在混合檢測極限時準確率達到100.0%。可以預計在實際的檢測工作中，采用實時熒光 PCR方法快速檢測熟肉制品中的動物源性成分切實可行，