動(dòng)物源性成分的PCR檢測及肉牛瘤胃細(xì)菌區(qū)系分析.pdf

1、本報(bào)告分為兩部分： 1.為了防止瘋牛病和綿羊癢病病原因子通過飼料傳播，降低BSE傳播到人的風(fēng)險(xiǎn)，我國對反芻動(dòng)物中使用動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品(乳及乳制品除外)做出了禁止性規(guī)定。本研究建立了針對反芻動(dòng)物飼料中常添加的牛、羊、豬、雞、魚成分的PCR檢測方法，選擇線粒體DNA為靶基因，設(shè)計(jì)并篩選引物，對引物的特異性和靈敏性進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，所建立的PCR檢測方法特異性較好，最低檢出限在0.1％-0.05％。通過氯仿和次氯酸洗滌樣品的方法還可

2、以達(dá)到區(qū)分肉骨粉和奶粉的目的。 在對我國奶業(yè)主產(chǎn)區(qū)動(dòng)物源性飼料使用情況調(diào)研抽樣的基礎(chǔ)上，對采集的364份樣品進(jìn)行檢測，首先使用一對能夠同時(shí)檢測牛、羊、豬、雞、魚及其它動(dòng)物成份的通用引物對含有動(dòng)物源性成份的樣品進(jìn)行篩選，然后使用特異引物對含有動(dòng)物源性成份的樣品進(jìn)行動(dòng)物種類鑒別。結(jié)果表明有66份樣品含有動(dòng)物源性成分，占總樣品數(shù)的18.1％；其中有18份檢出牛源性成分、11份檢出羊源性成分、26份檢出豬源性成分，21份檢出雞源性成分、

3、44份檢出魚源性成分。 結(jié)論：盡管我國已有相應(yīng)政策法規(guī)出臺(tái)，但依然存在以動(dòng)物源性飼料飼喂反芻動(dòng)物的現(xiàn)象，此外，動(dòng)物源性飼料的生產(chǎn)中還存在一些摻假的現(xiàn)象，出于安全和質(zhì)量需要求，進(jìn)一步提高監(jiān)督和檢測力度很有必要。 2.食物中的順9反11-共軛亞油酸(CLA)對人體健康有益。在反芻動(dòng)物日糧中添加不飽和脂肪酸可提高乳和肉中CLA的含量，但不飽和脂肪酸對瘤胃細(xì)菌有一定的毒性作用。本研究旨在分析肉牛日糧中添加2％魚油后瘤胃細(xì)菌區(qū)系的

4、變化。分別于添加魚油前后搜集瘤胃液提取總DNA，根據(jù)細(xì)菌通用引物27F/1492R擴(kuò)增16SrDNA基因序列，分別構(gòu)建兩個(gè)16SrDNA基因文庫，從每個(gè)文庫中各隨機(jī)挑取384個(gè)克隆，陽性克隆采用HhaⅠ進(jìn)行限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析、聚類，取各RFLP類群中的1個(gè)克隆進(jìn)行16SrDNA序列測定，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹分析細(xì)菌區(qū)系多樣性的變化。RFLP分析表明添加魚油前和添加魚油后文庫的RFLP圖譜分別可以分成74和41個(gè)RFLP類群，

5、序列測定結(jié)果表明：添加魚油前后的優(yōu)勢菌群均為噬纖維菌-屈撓桿菌-擬桿菌(Cytophaga-Flexibacter-Bacteroides，CFB)和低G+C含量革蘭氏陽性菌(lowG+CGrampositivebacteria，LGCGPB)，但是添加魚油后文庫中LGCGPB門細(xì)菌比例降低，而且未檢測到纖維桿菌門細(xì)菌；序列測定結(jié)果表明：有50％-60％的測定序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列相似性≥97％，90％以上為未培養(yǎng)的細(xì)菌，添