使用crisprcas9技術(shù)和talen技術(shù)敲除斑馬魚(yú)aftpha、sertad2a、sich73131e21.5、panel、sicnh21189o9.6、rsph3及rsph4a基因

1、分類號(hào)：Q 8 1密級(jí)：⑧∥戶單位代碼：1 0 4 2 2學(xué) 號(hào)：2 0 1 2 1 1 7 0 8蒙只番S H A N D O N GU N I V E R S I T Y碩士學(xué)位論文T h e s i sf o r M a s t e r D e g r e e( 專業(yè)學(xué)位)論文題目：使用C R I S P R ／C a s 9 技術(shù)和T A L E N 技術(shù)敲除斑馬魚(yú)a f t p h a ．．s e r t a d 2 a ．．

2、s i ：c h 7 3 —1 3 1 e 2 1 ．5 、p a n e l ，s i ：c h 2 1 1 - 8 9 0 9 ．6 、r s p h 3 及r s p h 4 a 基因K n o c k o u t o f z e b r a f i s ha f t p h a ，s e r t a d 2 a ，s i ：c h 7 3 —1 3 1 e 2 1 ．5 ．p a n e la n ds i ：c h 2 1 1

3、 —8 9 0 9 ．6g e n e b y C R I S P R ／C a s 9 a n d r s p h 3a n d r s p h 4 a g e n e b y T A L E N作者姓名 郭瀟培養(yǎng) 單 位 生命科學(xué)學(xué)院專業(yè) 名 稱指導(dǎo) 教 師合 導(dǎo) 師生物工程張燕君教授2 0 1 5 年 5 月 2 5 日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要???????????????????????????????????IA 】E

4、 l S T R A C T ．??．?．．．???．?．．?．?．．?．?．???．?．?．??．?．????．?．．?．?．?．?．．??．．．??．??l l 】【符號(hào)說(shuō)明??????????????????????????????????一V第一章綜述?????????????????????????????????．11 ．1 基因敲除技術(shù)概述??????????????????????????一1】．2 Z F N ( 鋅指

5、核酸酶) ?????????????????????????．．11 ．：；T A L E N 及C R I S P R ／C a s 9 ????????????????????????????????31 ．3 ．1 T A L E N ( 轉(zhuǎn)錄因子類似效應(yīng)核酸酶) ???????????????一31 ．3 ．2 C R I S P R ／C a s 9 ( 規(guī)律成簇間隔短回文重復(fù)) ?????????????51 ．3 ．3 T

6、 A L E N 和C R I S P R ／C a s 9 系統(tǒng)工具?????????????????91 ．3 ．4 T A L E N 和C I u S P R ／C a s 9 前景???????????????????9第二章使用C R I S P R ／C a s 9 敲除斑馬魚(yú)基因a f i p h a 、s e r t a d 2 a 、s i ：c h 7 3 —1 3 I e 2 1 ．5 、p a n e l 和s

7、 i ：c h 2 1 1 —8 9 0 5 1 6 ?????????????????????????????????????．．112 ．1 前言????????????????????????????????．】12 ．2 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法?????????????????????????1 12 ．2 ．】 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物???????????????????????????．1 12 ．2 ．2 載體、菌株、工具酶和試劑盒????

8、??????????????．1 22 ．2 ．3 其它試劑???????????????????????????．1 22 ．2 ．4 實(shí)驗(yàn)所用儀器?????????????????????????．1 32 ．2 ．5 實(shí)驗(yàn)方法???????????????????????????．1 42 ．3 結(jié)果與討論?????????????????????????????．2 92 ．3 ．1 a f l p h a 等基因序列獲得???

9、??????????????????．．2 92 ．3 ．2 確定C a s 9 靶位點(diǎn)及引物?????????????????????3 52 ．3 ．3 構(gòu)建g R N A 體外轉(zhuǎn)錄載體????????????????????3 92 t 3 ．4 g R N A 轉(zhuǎn)錄載體線性化?????????????????????．4 02 ．3 ．5 體外轉(zhuǎn)錄g R N A 及純化?????????????????????4 l2 ．3 ．