15796.利用hrm技術(shù)對cyp2c19基因進行雙重snp分型和talen介導的小鼠p53基因敲除

1、利用H吣術(shù)對CYP2C19基因進行雙IlSNP分型和TALEN介導的小豆p釕基因敲除指導老師：盧大儒教授指導小組：陳紅巖副教授陳浩明副教授范薇薇講師復旦大學生命科學學院遺傳工程國家重點實驗室中文摘要第—部分應用HRM技術(shù)對CYP2C19“2和CYP2C193進行雙重SNP分型氯毗格雷是一種廣泛用于預防靜脈血栓形成的抗血小板藥物。研究表明，攜帶有CYP2C19基因功能缺失型等位基因CYP2C192、CYP2C193的病人，其體內(nèi)代謝氯吡格

2、雷成為其活性形式的能力降低，導致氯吡格雷抑制血小板聚集功能減弱。本研究旨在建立一種利用高分辨率熔解曲線分析(high—resolutionmeltingcurveanalysiS，HRM)技術(shù)在閉合單管中同時對CYP2C192、CYP2C193兩個多態(tài)性位點進行簡便、準確分型的方法。本實驗針對兩個SNP位點分別設(shè)計特異性的HRM引物，并在兩個位點引物的5’端分別加上富含AT和Gc的序列，保證兩個位點的擴增產(chǎn)物熔解峰無重疊。利用HRM技術(shù)

3、，我們快速、靈敏的對64例隨機DNA樣本的CYP2C192、CYP2C193兩個多態(tài)性位點進行了基因分型，且HRM方法的分型結(jié)果與測序驗證結(jié)果完全一致。因此，利用HRM技術(shù)可以實現(xiàn)在閉合單管中簡便、準確地對CYP2C192、CYP2C193兩個多態(tài)性位點同時進行基因分型。該方法有望應用于臨床，指導氯吡格雷的個體化用藥。關(guān)鍵詞：高分辨率熔解曲線分析；CYP2C192；CYP2C193：氯吡格雷：SNP分型第二部分TALEN介導的小鼠p53

4、基因修飾TALEN是由植物病原菌——黃單胞菌的轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應物(transcriptionactivator一1ikeeffectorsTALE)蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和FokI核酸酶的DN叫乍特異性切割結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的內(nèi)切核酸酶。TALEN可以特異性識別并切割DNA序列，引起DNA雙鏈斷裂，從而引發(fā)非同源末端連接和同源重組，目前廣泛應用于基因定點修飾和定點突變。本課題旨在利用TALEN技術(shù)，實現(xiàn)對小鼠細胞p53基因進行定點修飾。我們設(shè)