褪黑素對(duì)小鼠胃癌c-Myc,p53表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察褪黑素對(duì)小鼠前胃癌細(xì)胞MFC增殖和凋亡的影響，并通過(guò)荷胃癌小鼠模型研究褪黑素對(duì)癌基因c-Myc和抑癌基因p53表達(dá)的影響，探討褪黑素抑制腫瘤的一些可能機(jī)制。
　　方法：
　　1.建立小鼠前胃癌細(xì)胞株MFC褪黑素干預(yù)模型：MFC細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，按不同濃度褪黑素干預(yù)不同時(shí)間分組，分別為：0mM、2mM、4mM、6mM、8mM組（24h）；0mM、2mM、4mM、6mM組（48h）；0mM、2mM、4mM組（

2、72h）。觀察細(xì)胞形態(tài)變化，并進(jìn)行后續(xù)研究。
　　2.建立荷胃癌小鼠模型：選用615近交系小鼠，MFC細(xì)胞計(jì)數(shù)后，按5×105個(gè)細(xì)胞/小鼠，右腋皮下注射，一周后，荷瘤模型建立成功，給予不同濃度褪黑素干預(yù)一周：A、荷瘤空白對(duì)照組：荷瘤成功后每天腹腔注射生理鹽水100mg/kg；B、褪黑素低劑量組（25mg/kg）；C、MLT中劑量組（50mg/kg）；D、MLT高劑量組（100mg/kg）。
　　3.應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法定

3、位細(xì)胞c-Myc和p53蛋白的表達(dá)。
　　4.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR比較分析褪黑素干預(yù)后各組細(xì)胞及腫瘤組織中c-Myc和p53mRNA表達(dá)量的變化。
　　5.應(yīng)用蛋白免疫印跡（Westernbolt）技術(shù)和圖像分析軟件分析褪黑素干預(yù)后各組細(xì)胞及腫瘤組織中c-Myc和p53蛋白表達(dá)量的變化。
　　6.應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法定量檢測(cè)腫瘤組織中c-Myc和p53蛋白表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度褪黑素

4、不同時(shí)間干預(yù)下各組胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，形態(tài)變化明顯，凋亡增加。
　　2.免疫細(xì)胞化學(xué)顯示，小鼠前胃癌細(xì)胞MFC中c-Myc、p53均在胞核表達(dá)，c-Myc在胞漿中也有表達(dá)。
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，各褪黑素干預(yù)組MFC腫瘤細(xì)胞中c-Myc mRNA表達(dá)減少，除2mM（48h）組外，各組均有顯著性差異；p53 mRNA表達(dá)增加，各組均有顯著性差異。與對(duì)照組相比，各褪黑素干預(yù)組腫瘤組織中c-MycmR

5、NA表達(dá)減少，各組均有顯著性差異；p53mRNA表達(dá)增加，各組均有顯著性差異。
　　4. Westernbolt結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，各褪黑素干預(yù)組MFC腫瘤細(xì)胞及腫瘤組織中c-Myc蛋白表達(dá)均減少，除低劑量組外各組均有顯著性差異；各褪黑素干預(yù)組腫瘤細(xì)胞p53蛋白表達(dá)減少，除2mM組（24、48h）、4mM組（48h）外，各組均有顯著性差異。而與對(duì)照組相比，各褪黑素干預(yù)組腫瘤組織中p53蛋白表達(dá)增加，除低劑量組外，各組均有顯著性

6、差異。
　　5.免疫組化結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，褪黑素各干預(yù)組腫瘤組織中c-Myc陽(yáng)性蛋白平均光密度值減少，各組均有顯著性差異；p53陽(yáng)性蛋白平均光密度值增加，與對(duì)照組相比，各組均有顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　小鼠前胃癌細(xì)胞MFC經(jīng)不同濃度褪黑素干預(yù)24h、48h、72h后，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，出現(xiàn)凋亡，大致呈劑量依賴性；同時(shí)，癌基因c-Myc的轉(zhuǎn)錄、翻譯、表達(dá)水平都有不同程度的下調(diào)，而抑癌基因p53的轉(zhuǎn)錄、翻譯、