出芽短梗霉的誘變選育及丙二酸抗性篩選聚蘋果酸高產(chǎn)菌-畢業(yè)論文

1、1出芽短梗霉的誘變選育及丙二酸抗性篩選聚蘋果酸高產(chǎn)菌出芽短梗霉的誘變選育及丙二酸抗性篩選聚蘋果酸高產(chǎn)菌摘要：目的摘要：目的：以出芽短梗霉（A.pullulans）AH2為出發(fā)菌株，經(jīng)紫外誘變和丙二酸抗性篩選獲得聚蘋果酸高產(chǎn)菌株。方法方法：以AH2為起始菌種，經(jīng)制霉菌素預(yù)處理，改變了出芽短梗霉細(xì)胞膜的通透性，再經(jīng)紫外線誘變后進(jìn)行丙二酸抗性篩選，然后經(jīng)溴鉀酚綠初篩，根據(jù)篩選培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)特征以及HC值的大小，選出用于發(fā)酵的菌株，最后對發(fā)

2、酵產(chǎn)生的聚蘋果酸進(jìn)行定量測定，篩選獲得PMA高產(chǎn)菌株。結(jié)果結(jié)果：最終獲得一株出芽短梗霉高產(chǎn)菌株丙554，其搖瓶發(fā)酵產(chǎn)量達(dá)到了20.80gL，比出發(fā)菌株提高了6%且高產(chǎn)特性穩(wěn)定。結(jié)論結(jié)論：對丙二酸耐受的出芽短梗霉菌株可以高產(chǎn)聚蘋果酸，此種選育方法克服了隨機(jī)篩選的盲目性，提高了菌種篩選的效率。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：聚蘋果酸；PMA高產(chǎn)菌株；溴鉀酚綠初篩；紫外誘變；丙二酸抗性篩選；出芽短梗霉Screeningofhighpolymalicacidm

3、utantofAureobasidiumpullulansagainstmalonicacidofSuccinodehydrogenaseInhibitAbstract：ObjectiveStartingfromtheAH2bymutagenesisscreeningtoobtainpolymalicacidproductionbyAureobasidiumpullulansstrains.MethodsTakingAH2asthest

4、artingstrainthroughnystatinpretreatmentchangedbyAureobasidiumcellmembranepermeabilityafterUVmutagenesisofmalonicacidresistancescreeningthenbypotassiumbrominephenolfirstgreenscreenaccdingtotheionofculturebasedonthempholog

5、icalacteristicsofthecolonytheHCvaluestrainsffermentation.AttheendoffermentationtoproducepolymalicacidwasquantitativelydeterminedscreenedtoobtainhighyieldstrainsofPMA.ResultsFinallyapolymalicacidhighyieldstrain554wasobtai

6、neditsshakeflaskfermentationproductionreached20.80gLtheyieldwasincreasedby6%comparedwiththestartingstrainAH2theyieldwasstable.ConclusionAureobasidiumpullulansofmalonicacidtolerancecanproducehigheryieldofpolymalicacidbyfe

7、rmentation.Thismethodovercametheblindnessofromscreeningimprovethe3聚蘋果酸有α、β、γ等3種結(jié)構(gòu)，其中βPMA在自然界廣泛存在，用途也最為廣泛，微生物發(fā)酵所得均為β型[2]。蘋果酸和聚蘋果酸的結(jié)構(gòu)如圖1所示[3]。圖1蘋果酸與3種聚蘋果酸的結(jié)構(gòu)Fig.1Structureofmalicacidpoly(malicacid)s聚蘋果酸可降解生成蘋果酸單體其中L蘋果酸是生物體

8、內(nèi)三羧酸循環(huán)(TCA)的中間體可參與代謝活動而被生物體吸收。此外對聚蘋果酸的側(cè)鏈COOH進(jìn)行修飾或改性引入功能基團(tuán)或藥物分子從而提高藥效和降低毒性。聚蘋果酸的諸多優(yōu)點使其在藥物載體和生物材料等領(lǐng)域獲得重要的應(yīng)用在諸如手術(shù)縫合線、藥物控制釋放體系、組織工程支架材料及食品包裝材料等方面有著廣闊的應(yīng)用前景[4]。1.3聚蘋果酸的合成現(xiàn)狀聚蘋果酸的合成現(xiàn)狀聚蘋果酸的生產(chǎn)方法主要分為微生物發(fā)酵法與化學(xué)合成法，化學(xué)合成法多以β烷氧羰基丙內(nèi)酯為單體，

9、在引發(fā)劑的條件下，通過開環(huán)聚合得到，成本相對較高[5]?；瘜W(xué)合成法得到的產(chǎn)物分子量低約為2～4kDa不具備實際的應(yīng)用價值；且催化劑有毒性副產(chǎn)物較多產(chǎn)物分離較困難并且合成步驟冗長提純工藝復(fù)雜收率低(＜20﹪)合成成本很高嚴(yán)重制約了其規(guī)?；a(chǎn)。與化學(xué)合成法相比生物合成法得到的β聚蘋果酸分子量高可達(dá)200～760kDa；所需的原料簡單易得反應(yīng)條件溫和產(chǎn)物較純近年來受到普遍的重視；但目前存在聚蘋果酸的發(fā)酵產(chǎn)量低的缺點距離聚蘋果酸工業(yè)化生產(chǎn)的要