γ-亞麻酸產(chǎn)生菌深黃被孢霉的誘變選育.pdf

1、γ-亞麻酸（γ-linolenic acid, GLA）作為人體必需脂肪酸參與細(xì)胞膜的組成，是前列腺素（PG）、血栓素A2（TxA2）和白三烯（LT）的直接前體。對(duì)人體的激素調(diào)節(jié)和脂肪酸代謝也發(fā)揮著重要作用，尤其在心血管疾病、糖尿病并發(fā)癥、特征性濕疹、病毒感染以及癌癥等方面具有很好的預(yù)防與治療作用。傳統(tǒng)的γ-亞麻酸主要來源于植物，由于資源和環(huán)境的局限性近年來微生物法生產(chǎn)γ-亞麻酸的研究逐漸成為了熱門。
　　本文以深黃被孢霉As3.

2、3410為出發(fā)菌株，通過對(duì)紫外氯化鋰復(fù)合誘變和初篩條件的研究，建立了快速、便捷、高通量的誘變篩選體系。誘變條件，氯化鋰添加量3g/L，紫外誘變時(shí)間30s；初篩，馬來酰肼在培養(yǎng)基中的添加量為40mg/L，深黃被孢霉中脂肪酸脫氫酶酶活測(cè)定的條件為pH8.4、溫度35℃、紅四氮唑(TTC)添加量0.8％、時(shí)間1h。經(jīng)過反復(fù)誘變篩選獲得一株遺傳穩(wěn)定的γ-亞麻酸高產(chǎn)菌株F312。其γ-亞麻酸產(chǎn)量達(dá)到了1236mg/L，比出發(fā)菌株(725mg/L)

3、提高了70%。
　　研究深黃被孢霉產(chǎn)γ-亞麻酸過程的代謝調(diào)控，從中得出對(duì)深黃被孢霉產(chǎn)γ-亞麻酸有促進(jìn)作用的營養(yǎng)成分，并利用Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和響應(yīng)面設(shè)計(jì)對(duì)培養(yǎng)基營養(yǎng)成分進(jìn)行篩選優(yōu)化。Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與統(tǒng)計(jì)分析表明：葡萄糖、KNO3、乙酸鈉、檸檬酸鈉為發(fā)酵的關(guān)鍵因素。以γ-亞麻酸產(chǎn)量為響應(yīng)目標(biāo)，對(duì)4因素進(jìn)行中心旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)，并經(jīng)響應(yīng)面法優(yōu)化分析得到影響γ-亞麻酸產(chǎn)量的二階模型，確定出四個(gè)關(guān)鍵

4、因素的最佳水平。綜合Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和中心旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)得出最佳的培養(yǎng)基配方：葡萄糖100.90g/L、KNO31.57g/L、乙酸鈉3.42g/L、檸檬酸鈉4.56g/L、酵母膏3.75g/L、KH2PO42.25g/L、MgSO4?7H2O0.60g/L、CaCl20.30g/L、FeSO40.15g/L、ZnSO40.20g/L。在最佳條件下γ-亞麻酸產(chǎn)量達(dá)到了1500.73mg/L比誘變后產(chǎn)量1236mg/L