蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定及性質(zhì)實(shí)驗(yàn)

1、蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定及性質(zhì)實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定及性質(zhì)實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康某醪綄W(xué)會(huì)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的基本方法，并了解蛋白質(zhì)的性質(zhì)。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)分子是兩性電解質(zhì)，當(dāng)調(diào)節(jié)溶液的酸堿度，使蛋白質(zhì)分子上所帶的正負(fù)電荷相等時(shí)，在電場(chǎng)中，該蛋白質(zhì)分子既不向正極移動(dòng)，也不向負(fù)極移動(dòng)，這時(shí)溶液的pH值，就是該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)（pI）。不同蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)不同。在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度最小，容易沉淀析出。因此，可以借助在不同pH溶液中

2、的某蛋白質(zhì)的溶解度來(lái)測(cè)定該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。在蛋白質(zhì)溶液中加入一定濃度的中性鹽，蛋白質(zhì)即從溶液中沉淀析出，這種作用稱(chēng)為鹽析。鹽析法常用的鹽類(lèi)有硫酸銨、硫酸鈉等。蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過(guò)程。由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀，當(dāng)降低其鹽類(lèi)濃度時(shí)，又能再溶解。而重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。三、試劑和器材三、試劑和器材⑴高筋面粉、低筋面粉。⑵1molL醋酸。（每組自配（每組自配0.1molL0.1molL醋酸、醋酸、0.01molL0.01m

3、olL醋酸）醋酸）⑶0.5%酪蛋白溶液。稱(chēng)取2.5克酪蛋白，放入燒杯中，加入40℃的蒸餾水，再加入50毫升1N氫氧化鈉溶液，微熱攪拌直到蛋白質(zhì)完全溶解為止。將溶解好的蛋白溶液轉(zhuǎn)到500毫升容量瓶中，并用少量蒸餾水洗凈燒杯，一并倒入容量瓶。在容量瓶中再加入1N醋酸溶液50毫升，搖勻，再加蒸餾水定容至500毫升，得到略顯混濁的、在0.1NNaAc溶液中的酪蛋白溶液。⑷雞蛋白溶液。將80mL雞蛋清與800mL蒸餾水混合均勻后，用潔凈的多層濕紗

4、布?jí)|在漏斗上過(guò)濾，濾液即為雞蛋白溶液（不能有不溶性物懸?。?。要現(xiàn)配現(xiàn)用，最好使用經(jīng)過(guò)煮沸并封在容器中隔絕空氣冷卻的蒸餾水。⑸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的CuSO4溶液。（每排（每排3組合配）組合配）⑹(NH4)2SO4飽和溶液。（確保有固體析出）（確保有固體析出）⑺天平、水浴鍋、移液管、試管等。四、操作步驟四、操作步驟1、蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定、蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測(cè)定⑴取5支同種規(guī)格的試管，編號(hào)，按表1順序精確加入各種試劑，特別注特別注意0.5%0.5%酪

5、蛋白溶液最后加入，酪蛋白溶液最后加入，然后逐一振蕩試管，使試管混合均勻。此時(shí)1、2、3、4、5管的pH值依次為5.9、5.3、4.7、4.1、3.5。⑵將上述試管靜置于試管架上15min15min后，仔細(xì)觀察，比較各管的渾濁度，將觀察的結(jié)果記錄于表格內(nèi)，并指出酪蛋白的等電點(diǎn)。注意：注意：本試驗(yàn)各種試劑的濃度及用量均要求很準(zhǔn)確，確保緩沖液的pH值準(zhǔn)確；渾濁度可用－、＋、＋＋、＋＋＋等符號(hào)表示，最混濁的一管的最混濁的一管的pHpH值即為值即