植物活性成分與蛋白質(zhì)的結(jié)合性質(zhì)及對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、本論文采用熒光光譜、紫外–可見吸收光譜、圓二色譜和紅外光譜法并結(jié)合分子模擬技術(shù),在模擬人體生理酸度環(huán)境(pH7.4)下,研究了幾種天然植物活性成分與血清白蛋白的結(jié)合性質(zhì)以及對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響,該研究對于深入認(rèn)識天然植物有效成分在體內(nèi)的吸收、分布、代謝及藥理作用具有重要的理論意義。
　　本文的主要研究內(nèi)容和結(jié)果概述如下:
　　1.簡要介紹了血清白蛋白的結(jié)構(gòu)、功能和生理特性,并闡述了血清白蛋白與小分子相互作用的研究方法和進(jìn)展。<

2、br>　　2.在模擬人體生理條件下,運用熒光猝滅法、紫外–可見吸收光譜法、圓二色譜法和紅外光譜技術(shù),研究了蛇床子素與人血清白蛋白(HSA)的結(jié)合特性。結(jié)果表明,蛇床子素通過與 HSA形成基態(tài)復(fù)合物使 HSA的內(nèi)源熒光猝滅;根據(jù)van't Hoff方程所得,焓變(ΔH°)和熵變(ΔS°)值均大于零,表明疏水作用力是兩者結(jié)合的主要驅(qū)動力。位點競爭實驗表明蛇床子素結(jié)合在 HSA的 siteΙΙΙ位。利用非輻射能量轉(zhuǎn)移理論計算出蛇床子素在 HS

3、A中的結(jié)合位置與色氨酸殘基間的結(jié)合距離為3.99 nm。紅外光譜和圓二色光譜分析顯示,蛇床子素的存在誘導(dǎo) HSA的二級結(jié)構(gòu)發(fā)生了部分改變。
　　3.采用熒光、紫外、圓二色和紅外等光譜學(xué)手段結(jié)合分子模擬技術(shù),探測了黃酮類化合物石吊蘭素與牛血清白蛋白(BSA)的結(jié)合機(jī)理以及 BSA分子結(jié)構(gòu)的變化,同時研究了3種 B族維生素(VB1、VB2、VB3)分別對石吊蘭素與 BSA反應(yīng)體系的影響。結(jié)果表明,石吊蘭素以靜態(tài)方式猝滅了 BSA的內(nèi)源

4、熒光,兩者結(jié)合的主要驅(qū)動力是氫鍵和范德華力。位點競爭實驗表明,石吊蘭素主要結(jié)合在 BSA疏水空腔的亞域 IIA即 site I位點,分子模擬的結(jié)果證實了這一結(jié)論。另外,三維熒光、紫外、圓二色和紅外光譜分析表明,石吊蘭素使得 BSA的二級結(jié)構(gòu)發(fā)生了一定程度的改變。VB1、VB2、VB3的加入使得 BSA?石吊蘭素體系的猝滅常數(shù) Ksv和結(jié)合常數(shù) K增大,結(jié)合位點數(shù)增多,結(jié)合距離減小,表明VB1、VB2、VB3均能夠增加 BSA?石吊蘭素體

5、系的穩(wěn)定性。VB1的存在使得 BSA?石吊蘭素體系的主要作用力類型從氫鍵和范德華力為主轉(zhuǎn)變?yōu)橐允杷饔昧橹?VB2、VB3的加入并沒有改變體系的主要作用力類型。圓二色譜結(jié)果表明,VB1、VB2、VB3的加入導(dǎo)致 BSA的α?螺旋含量有所增加。VB1、VB2、VB3與BSA的結(jié)合誘導(dǎo) BSA分子構(gòu)象變化是維生素影響 BSA?石吊蘭素結(jié)合的主要方式。
　　4.采用多種光譜學(xué)方法和分子模擬技術(shù),研究了生理酸度條件下香豆素類化合物毛兩面

6、針?biāo)亟Y(jié)合 HSA熱力學(xué)性質(zhì)及其對 HSA結(jié)構(gòu)的誘導(dǎo)。熒光滴定實驗結(jié)果顯示,毛兩面針?biāo)剽?HSA的熒光是由于形成 HSA?毛兩面針?biāo)貜?fù)合物而引起,毛兩面針?biāo)嘏c HSA有較強的親合作用(結(jié)合常數(shù)達(dá)105數(shù)量級)。熱力學(xué)參數(shù)分析揭示 HSA?毛兩面針?biāo)氐慕Y(jié)合主要由疏水作用和氫鍵驅(qū)動。毛兩面針?biāo)刂饕Y(jié)合在 HSA疏水空腔內(nèi)的亞域 IIA即 site I位,分子模擬直觀地展現(xiàn)了HSA?毛兩面針?biāo)貜?fù)合物的立體結(jié)合姿態(tài)。毛兩面針?biāo)嘏c HSA疏水腔內(nèi)