實驗-考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)含量

1、實驗五實驗五考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)含量考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)含量一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康?.掌握考馬斯亮藍染色法定量測定蛋白質(zhì)含量的原理與方法2.熟練分光光度計的使用和操作方法。二、二、實驗原理實驗原理考馬斯亮藍G250測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種，它與蛋白質(zhì)的疏水微區(qū)相結(jié)合，這種結(jié)合具有高敏感性。它在酸性溶液中呈棕紅色，最大光吸收峰在465nm，當它與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物時，其最大吸收峰改變?yōu)?95nm?？捡R斯亮藍G250—蛋白

2、質(zhì)復(fù)合物呈藍色，在一定范圍內(nèi)，595nm下光密度與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系，故可以用于蛋白質(zhì)含量的測定。考馬斯亮藍結(jié)合法是近年來發(fā)展起來的蛋白質(zhì)定量測定法，本方法具有操作方便、快速、干擾因素少的特點。離心機的使用說明：1.要離心的離心管和管套要稱重，重量不等時將水加在管套里。2離心管的放置是對角線放置，要求必須對稱。3.先將離心機轉(zhuǎn)速旋鈕恢復(fù)到零刻度后，再定時間，定好時間后緩慢旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速旋鈕，使離心機均勻的提速到預(yù)定轉(zhuǎn)速。分光光度計的使用說明

3、：1.接通電源開關(guān)，預(yù)熱20min后，再選擇須用的單色光波長。2.放入已加入溶液的比色皿，蓋上樣品室蓋，推動試樣架拉手，使對照比色皿（溶液裝入4／5高度，置第一格）置于光路上，調(diào)節(jié)100％透射比按鈕，使吸光度值A(chǔ)=0.00。3.推動試樣架拉手，使樣品比色皿置于光路上，讀出吸光度值。4.測量完畢，取出比色皿，洗凈后置于乙醇溶液中浸泡脫色。5.電源開關(guān)置于“關(guān)”，拔下電源插頭。三、試劑與器材：試劑與器材：1.試劑：（1）0.9％NaCl：9

4、gNaCl溶解在1L的容量瓶中。（2）標準蛋白質(zhì)：稱取50mg結(jié)晶牛血清蛋白定溶于50ml容量瓶里。（3）染液：考馬斯亮藍G2500.5g，溶于250mL95%乙醇，再加入曲線。2.待測樣品測定試管中加蛋白質(zhì)樣品1.0mL，再加入5.0mL考馬斯亮藍G250試劑，搖勻，放置5min后，在595nm波長下吸光度值，記錄A595。根據(jù)所測A595從標準曲線上查得蛋白質(zhì)含量。并計算蛋白樣品的濃度（mgml）。五、五、實驗結(jié)果及分析實驗結(jié)果及分