黃草類石斛的分子標(biāo)記與鑒別研究.pdf

1、黃草類石斛的基源復(fù)雜，在無葉和花的情況下難以鑒別。隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，利用DNA 進(jìn)行物種分子鑒別的方法日益成熟，提高了物種鑒別的可靠性、準(zhǔn)確性。本研究選取了多種黃草類石斛常見原植物，利用DNA 序列，進(jìn)行了多種石斛的分子鑒別和標(biāo)記。
　　 利用通用引物通過PCR 擴(kuò)增出了流蘇石斛、黃石斛、細(xì)莖石斛、細(xì)葉石斛、球花石斛、鼓槌石斛、翅萼石斛、黑毛石斛等九種石斛屬植物的葉綠體非編碼區(qū)psbA-trnH 片段。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該片

2、段的長度范圍在745-768bp，可變位點(diǎn)57個(gè)，占整個(gè)片段的7.23％，包括15個(gè)信息位點(diǎn)，該片段存在5個(gè)插入/缺失位點(diǎn)。
　　 利用Mega 4.0 中的MCL模型計(jì)算出了這九種石斛的遺傳距離，構(gòu)建了MP 樹，分析了它們之間的遺傳關(guān)系。并提出可將rDNA ITS 序列與psbA-trnH 間隔區(qū)序列聯(lián)合起來作為石斛屬植物DNA 條形碼。
　　 流蘇石斛是藥典收錄的常用黃草類石斛之一，本研究利用ARMS 技術(shù)設(shè)計(jì)了鑒別

3、流蘇石斛及其相似種的LSJB ARMS 引物，實(shí)現(xiàn)了流蘇石斛快速準(zhǔn)確的分子鑒別。
　　 鑒于翅萼石斛與黑毛石斛不僅外部形態(tài)相似，還具有相同的ITS 序列，為了建立有效的分子鑒定手段，本實(shí)驗(yàn)利用葉綠體DNA的兩段非編碼間隔區(qū)—
　　 psbA-trnH 及trnT-trnL 序列，對這兩種石斛進(jìn)行了分子鑒別，探討了作為石斛屬植物DNA 條形碼的可行性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，翅萼石斛與黑毛石斛的這兩段非編碼區(qū)序列均具有顯著差異，能夠