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文檔簡(jiǎn)介
1、流蘇石斛(Dendrobium fimbriatum Hook.)、鐵皮石斛(Dendrobium officinaleKimura et Migo)為蘭科(Orchidaceae)石斛屬(Dendrobium Sw.)多年附生草本植物,是常用的貴重中藥材,以其新鮮或干燥的莖入藥,集藥用和觀賞價(jià)值于一身,鐵皮石斛(D. Officinale)更是藥用石斛之極品。目前,流蘇石斛、鐵皮石斛的自然資源已處于瀕危狀態(tài)。為了研究野生流蘇石斛、鐵皮
2、石斛遺傳多樣性、對(duì)其種質(zhì)資源的保存提出保護(hù)策略,本文通過(guò)對(duì)其微衛(wèi)星的開(kāi)發(fā)與分析,來(lái)研究他們居群間的遺傳多樣性。
本文通過(guò)磁珠富集法構(gòu)建流蘇石斛、鐵皮石斛的微衛(wèi)星文庫(kù)開(kāi)發(fā)SSR分子標(biāo)記。首先,用生物素標(biāo)記的混合探針(AG)15、(TG)15、(GAA)8、(GATA)7與經(jīng)過(guò)使用Sau3AI DNA內(nèi)切酶酶切流蘇石斛、鐵皮石斛的基因組總DNA進(jìn)行選擇性雜交,使用鏈霉親和素包裹的磁珠富集含有微衛(wèi)星標(biāo)記的DNA片斷,通過(guò)克隆、測(cè)
3、序構(gòu)建流蘇石斛、鐵皮石斛的微衛(wèi)星文庫(kù)。共得到流蘇石斛微衛(wèi)星序列19條,25條鐵皮石斛微衛(wèi)星序列,其中,鐵皮石斛有2條四堿基、1條3堿基重復(fù)的微衛(wèi)星序列。針對(duì)流蘇石斛微衛(wèi)星序列設(shè)計(jì)了15對(duì)引物,通過(guò)PCR反應(yīng)優(yōu)化篩選出10對(duì)擴(kuò)增結(jié)果顯出多態(tài)性的引物,這10條流蘇石斛微衛(wèi)星序列可作為標(biāo)記,可應(yīng)用于流蘇石斛遺傳多樣性分析。針對(duì)鐵皮石斛設(shè)計(jì)了20對(duì)引物,其中的13條序列作為鐵皮石斛的微衛(wèi)星標(biāo)記,可進(jìn)一步應(yīng)用于其居群間遺傳多樣性的研究。
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