28240.鐵皮石斛微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)、通用性檢測(cè)及種質(zhì)純度鑒定

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：l、堅(jiān)持以“求實(shí)、創(chuàng)新力的科學(xué)精神從事研究工作。2、本論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。3、本論文中除引文外，所有實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實(shí)的。4、本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。5、其他同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。研究生簽名：塒啁多薛El期：蘭竺』!：簍蘭2學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解南京師范大學(xué)有關(guān)

2、保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版；有權(quán)將學(xué)位論文用于非贏利目的的少量復(fù)制并允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱；有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索；有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。‘研究生簽名：均奇吲膨日期：一～———————————————————————————————————一一一～一一一～摘要摘要IIUfrlltIIIfff!

3、fIlfrI／fllt：I㈣㈣Y172645。鐵皮石斛(DendrobiumofficinaleKimulaetMigo)h我國(guó)特有的石斛屬藥用植物，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載，具有滋陰生津、潤(rùn)肺明目、抗癌防老等功效。近年來，由于鐵皮石斛保健品和藥品的大規(guī)模開發(fā)，不但使其野生資源遭受毀滅性的破壞，而且還導(dǎo)致了鐵皮石斛混淆品的泛濫，因此亟須建立有效的鐵皮石斛種質(zhì)鑒別的可靠手段。在植物基因組中，由于微衛(wèi)星寡核苷酸的重復(fù)次數(shù)在同一物種的不同

4、基因型間具有差異且相對(duì)穩(wěn)定，因而SSR標(biāo)記呈現(xiàn)高度多態(tài)性，可用于植物種質(zhì)的鑒別。關(guān)于鐵皮石斛SSR標(biāo)記的開發(fā)和應(yīng)用，本文主要進(jìn)行了如下三個(gè)方面的研究：(一)運(yùn)用磁珠富集法開發(fā)鐵皮石斛的微衛(wèi)星鐵皮石斛微衛(wèi)星的開發(fā)步驟如下：(1)用Sau3AI酶切鐵皮石斛基因組DNA，加接頭進(jìn)行連接；(2)根據(jù)接頭的序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR，用生物素標(biāo)記的(AGA)8和(AC)15兩種探針于不同雜交溫度分別與之雜交；(3)利用鏈霉親和素包裹的磁珠富集含有微衛(wèi)

5、星DNA的片段，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增；(4)微衛(wèi)星序列的克隆測(cè)序。本研究共成功開發(fā)出197條微衛(wèi)星序列，并設(shè)計(jì)了60對(duì)微衛(wèi)星引物。利用這60對(duì)引物初步擴(kuò)增隨機(jī)選取的48個(gè)鐵皮石斛貴州居群樣本，經(jīng)過擴(kuò)增產(chǎn)物穩(wěn)定、條帶清晰、多態(tài)性高等方面的篩選，共選取了15對(duì)SSR引物用于本實(shí)驗(yàn)的研究。(二)探討鐵皮石斛的SSR標(biāo)記在石斛屬其它植物上的通用性運(yùn)用所選的15對(duì)鐵皮石斛的SSR引物，對(duì)20種石斛屬植物進(jìn)行跨種擴(kuò)增檢測(cè)，除XML004，XML007在

6、石斛種間無(wú)相應(yīng)大小范圍的SSR擴(kuò)增產(chǎn)物外，其它SSR引物在20個(gè)石斛屬種材料上能全部或部分?jǐn)U增出清晰地SSR條帶，并在種問存在一定的多態(tài)性，其中有9對(duì)(60％)引物在所有供試材料上都能擴(kuò)增出條帶，通用率達(dá)到了867％。(三)運(yùn)用SSR標(biāo)記進(jìn)行鐵皮石斛種質(zhì)純度鑒定和真實(shí)性判別隨機(jī)抽取福建某居群種質(zhì)(FJ02)的500株組培苗，對(duì)其4個(gè)SSR位點(diǎn)(XML003、XML005、XML006、XML008)的帶型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。檢測(cè)出3個(gè)特殊單株在4