毛竹微衛(wèi)星分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用.pdf

1、毛竹(Phyllostachys pubescens)是禾本科(Gramineae)竹亞科(Bambusoideae)剛竹屬(Phyllostachys)植物。竹類植物生長(zhǎng)快,用途廣,具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和良好的水土保持功能,利用價(jià)值極高。毛竹是我國(guó)竹類資源中最主要的竹種之一,它分布廣,利用多,是部分山區(qū)農(nóng)民致富的重要產(chǎn)業(yè),具有很大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)和生態(tài)意義。但由于其繁殖方式是以地下鞭延伸為主的無(wú)性繁殖,個(gè)體區(qū)分非常困難,從而造成竹子分類和親

2、緣關(guān)系的混亂以及遺傳多樣性研究的困難。 分子標(biāo)記是進(jìn)行竹子遺傳多樣性分析、分類和系統(tǒng)演化等研究的有效手段。微衛(wèi)星(SSR)是指由1-6個(gè)核苷酸為單位,串聯(lián)重復(fù)的DNA序列,廣泛分布于真核生物的整個(gè)基因組中。微衛(wèi)星標(biāo)記具有共顯性、多態(tài)性高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),是比較理想的分子標(biāo)記,已在遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位、遺傳多樣性分析、親緣關(guān)系鑒別等方面有廣泛的應(yīng)用。目前國(guó)內(nèi)對(duì)竹類植物的微衛(wèi)星研究還很少,沒(méi)有開(kāi)發(fā)出真正的標(biāo)記位點(diǎn),限制了對(duì)竹子這些

3、領(lǐng)域的研究。 本文開(kāi)展毛竹微衛(wèi)星開(kāi)發(fā)與應(yīng)用的研究,主要從兩個(gè)方面來(lái)進(jìn)行。一是通過(guò)構(gòu)建毛竹的微衛(wèi)星富集文庫(kù),從文庫(kù)中分離出SSR序列：以生物素標(biāo)記的(CT)10為探針,同毛竹基因組DNA的Bfal酶切片段進(jìn)行雜交,借助磁珠篩選出含有微衛(wèi)星的片段。轉(zhuǎn)化入質(zhì)粒載體后得到80個(gè)陽(yáng)性克隆,進(jìn)行測(cè)序后發(fā)現(xiàn)含有3個(gè)微衛(wèi)星序列(3.75％);另一種是利用生物信息學(xué)的手段,通過(guò)搜索數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)得到微衛(wèi)星序列。利用軟件RepeatMasker在線對(duì)15

4、32條毛竹核酸序列進(jìn)行微衛(wèi)星統(tǒng)計(jì),發(fā)現(xiàn)了30個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)(1.96％)。 SSR微衛(wèi)星的應(yīng)用研究也包括兩個(gè)方面：一是運(yùn)用微衛(wèi)星標(biāo)記研究毛竹的遺傳多樣性；二是探討在毛竹上開(kāi)發(fā)的微衛(wèi)星位點(diǎn)在其它剛竹屬竹種中的通用性。具體包括：用這些引物,在11個(gè)毛竹變種或栽培種進(jìn)行擴(kuò)增,看是否有較好的多態(tài)性。目前已用14對(duì)引物進(jìn)行了擴(kuò)增,還未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性條帶。 用引物對(duì)剛竹屬6個(gè)竹種的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增,對(duì)符合要求的條帶測(cè)序,看是否有通用的