林麝（Moschus berezovskii）微衛(wèi)星分子標(biāo)記篩選及其應(yīng)用研究.pdf

1、麝是我國(guó)極其重要的資源動(dòng)物，由于亂捕亂獵和生境破壞，麝的數(shù)量急劇減少，瀕臨滅絕，現(xiàn)為國(guó)家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物。目前對(duì)于麝的研究多為形態(tài)學(xué)、分類(lèi)學(xué)、組織學(xué)研究，但是少有用分子生物學(xué)方法對(duì)于麝進(jìn)行研究，尤其是對(duì)于麝的遺傳學(xué)方面的研究。 微衛(wèi)星DNA屬于共顯性的遺傳標(biāo)記，廣泛的存在于基因組內(nèi)，含有豐富的多態(tài)性，能夠忠實(shí)反映個(gè)體特征，個(gè)體間的親緣關(guān)系，在人類(lèi)、家畜中已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，目前看來(lái)它是最適合于研究林麝遺傳多樣性問(wèn)題的工具。因此

2、，我們選擇了構(gòu)建林麝的微衛(wèi)星文庫(kù)，篩選多態(tài)性好的座位對(duì)于林麝的遺傳多樣性進(jìn)行初步的分析。 在本次研究中，我們利用了鏈親和素和生物素之間有強(qiáng)親和的原理，構(gòu)建了林麝的三個(gè)堿基重復(fù)的微衛(wèi)星富集文庫(kù)(CAA)<,8>和(AGC)<,8>文庫(kù)各一個(gè)。每個(gè)文庫(kù)含有幾百個(gè)轉(zhuǎn)化子，用PCR的方法從2個(gè)文庫(kù)中篩選陽(yáng)性克隆。發(fā)現(xiàn)所建微衛(wèi)星富集文庫(kù)(CAA)<,8>和(AGC)<,8>中的陽(yáng)性克隆率大致為10％，而測(cè)序結(jié)果表明，用該方法篩選的陽(yáng)性克隆

3、中含有(CAA)<,n>和(AGC)<,n>重復(fù)比率不高，各找到含有(CAA)<,n>和(AGC)<,n>重復(fù)序列一個(gè)。又在以前建立的(AC)<,12>文庫(kù)中選取24個(gè)陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序，并對(duì)其進(jìn)行多態(tài)性篩選，找到較好多態(tài)性座位6個(gè)。 用這6個(gè)座位對(duì)于都江堰金風(fēng)山和馬爾康養(yǎng)殖場(chǎng)的圈養(yǎng)林麝做遺傳多樣性分析。這六個(gè)座位等位基因數(shù)量為4～7個(gè)，平均每個(gè)座位在金鳳山居群中為5.5個(gè)，馬爾康居群中為5.9個(gè)；6個(gè)微衛(wèi)星座位在金鳳山居群中有效

4、等位基因數(shù)在3.076～5.628之間，而馬爾康居群有效等位基因數(shù)在3.032～4.654之間，而有效等位基因的平均值在兩個(gè)居群中的平均值分別為:4.235和3.834；金鳳山居群表觀(guān)雜合度(Ho)和期望雜合度(He)分別為0.3478～1.000和0.6748～0.8223，馬爾康居群表觀(guān)雜合度(Ho)和期望雜合度(He)分別為0.2083～0.9665和0.6701～0.7701；6個(gè)微衛(wèi)星座位的多態(tài)信息含量(PIC)最低為0.62