半滑舌鰨等九種海水魚微衛(wèi)星分子標(biāo)記的開發(fā)和應(yīng)用.pdf

1、渤海是黃海乃至整個(gè)北方海洋漁業(yè)資源的源頭。面積約7.8萬平方公里的渤海,是黃海、渤海乃至東海多種經(jīng)濟(jì)魚蝦類的主要產(chǎn)卵場(chǎng)、育幼場(chǎng)和索餌場(chǎng),黃、渤海有魚類300余種。歷史上,渤海最高年捕撈量約占全國(guó)捕撈總量的十分之一。渤海漁業(yè)對(duì)全國(guó)海洋漁業(yè)的發(fā)展意義重大。但是,自上世紀(jì)80年代以來,由于長(zhǎng)期的酷漁濫捕和水域污染、涉海工程建設(shè)等人為因素的共同影響,渤海漁業(yè)資源嚴(yán)重衰退,生態(tài)結(jié)構(gòu)遭到嚴(yán)重破壞,生物多樣性明顯下降,種類組成趨于小型化、低質(zhì)化,資源

2、生產(chǎn)功能嚴(yán)重退化。為了更好地保護(hù)和合理利用渤黃海漁業(yè)資源,采用不同分子標(biāo)記對(duì)一些具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值或生態(tài)學(xué)意義的魚類進(jìn)行群體遺傳分析,是魚類生態(tài)學(xué)、水產(chǎn)資源學(xué)以及魚類遺傳與育種學(xué)不可缺少的應(yīng)用基礎(chǔ)性的研究工作。
　　 本研究主要包括三部分內(nèi)容:第一部分是基于磁珠富集的方法,構(gòu)建了半滑舌鰨、牙鲆、綠鰭?cǎi)R面純、藍(lán)點(diǎn)馬鮫、小黃魚、(鱖)魚、黑鯛7種海水魚部分基因組DNA微衛(wèi)星富集文庫(kù)。通過篩選測(cè)序分別獲得131、202、121、33、2

3、3、60、35條含有微衛(wèi)星的序列,其中完美型、非完美型、混合型所占的平均比例分別為76.80％、13.66％和9.54％。文章中優(yōu)化的FIASCO法由于自身的高效低耗等優(yōu)點(diǎn)成為從海水魚類中大量篩選微衛(wèi)星標(biāo)記的最好選擇。
　　 第二部分是根據(jù)構(gòu)建的富集文庫(kù)中以及GENBANK數(shù)據(jù)庫(kù)中的微衛(wèi)星序列設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物,對(duì)綠鰭?cǎi)R面(純)、皮氏叫姑魚、梭魚3種魚類的自然捕撈群體進(jìn)行了遺傳結(jié)構(gòu)的分析,利用至少21個(gè)體對(duì)其中162個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行多態(tài)性

4、評(píng)價(jià),結(jié)果顯示擴(kuò)增得到的等位基因數(shù)目從2到18個(gè)不等,期望雜合度(He)和觀測(cè)雜合度(Ho)的范圍分別為0.1463到0.9449和0.1562到1.0000,平均值分別為0.6437和0.5774。其中皮氏叫姑魚微衛(wèi)星位點(diǎn)的平均期望雜合度最高為0.8052,說明其有較高的雜合性。
　　 第三部分內(nèi)容是半滑舌鰨微衛(wèi)星標(biāo)記在遺傳圖譜構(gòu)建、雌雄群體與人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育后代基因型分析中的應(yīng)用:1.為初步構(gòu)建半滑舌鰨遺傳圖譜,以全同胞家系

5、產(chǎn)生的84個(gè)F1子代為作圖群體,對(duì)306對(duì)SSR引物進(jìn)行多態(tài)篩,共獲得在雙親與后代中分離的多態(tài)微衛(wèi)星標(biāo)記表記100個(gè),可用于遺傳連鎖分析。但若需進(jìn)行主基因和QTL的分析以及真正實(shí)現(xiàn)分子標(biāo)記輔助選擇育種,還需獲得更多多態(tài)分離標(biāo)記以及開發(fā)新型SNP標(biāo)記,以提高圖譜中標(biāo)記的覆蓋水平;2.用8對(duì)半滑舌鰨微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)來自同一母本半滑舌鰨減數(shù)雌核發(fā)育魚苗24尾進(jìn)行了分析。其中4個(gè)座位全部為雜合。雜合比例最低的座位是Newcyse105,為0.583