3種石斑魚(yú)微衛(wèi)星標(biāo)記的開(kāi)發(fā)及跨種擴(kuò)增.pdf

1、微衛(wèi)星標(biāo)記由于多態(tài)性高、共顯性等特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于生物群體遺傳結(jié)構(gòu)分析、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建等方面。石斑魚(yú)是重要的世界性海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)，然而其遺傳多樣性的研究還十分有限。目前在石斑魚(yú)中缺乏足夠的微衛(wèi)星標(biāo)記。因此，為了評(píng)估石斑魚(yú)的遺傳多樣性，進(jìn)行分子輔助育種以指導(dǎo)生產(chǎn)，迫切需要開(kāi)發(fā)大量的微衛(wèi)星標(biāo)記。通過(guò)FIASCO法構(gòu)建七帶石斑魚(yú)(Epinephelusseptemfasciatus)、青石斑魚(yú)(Epinephelus awoara)、美洲黑石斑

2、魚(yú)(Centropristisstriata)的基因組微衛(wèi)星富集文庫(kù)，分離微衛(wèi)星DNA序列并對(duì)其特征進(jìn)行分析?；蚪MDNA經(jīng)Mse I限制性?xún)?nèi)切酶消化后，酶切片段與Mse I接頭連接，用生物素標(biāo)記的寡核苷酸探針與其雜交，雜交復(fù)合物結(jié)合到包被有鏈霉親和素的磁珠上，變性洗脫獲得單鏈目的片段，經(jīng)PCR擴(kuò)增形成雙鏈，然后克隆到pMD18-T載體上，轉(zhuǎn)化至DH5α中。菌落PCR法篩選陽(yáng)性克隆，挑選不同大小的陽(yáng)性克隆測(cè)序(ABI3730)。從七帶石

3、斑魚(yú)、青石斑魚(yú)、美洲黑石斑魚(yú)的基因組微衛(wèi)星富集文庫(kù)中，分別得到66，56，39個(gè)微衛(wèi)星序列。應(yīng)用primer3軟件對(duì)所篩選的微衛(wèi)星序列進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，分別得到55，36，28對(duì)引物。通過(guò)6％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行篩選，3種石斑魚(yú)中分別得到12，12，11個(gè)多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記，并對(duì)各個(gè)位點(diǎn)等位基因數(shù)目、等位基因片段大小范圍、觀察雜合度、期望雜合度指標(biāo)進(jìn)行初步分析。結(jié)果表明：FIASCO法能有效提高微衛(wèi)星標(biāo)記篩選效率。將研究所得到的多態(tài)性微