斜帶石斑魚四種生肌調(diào)節(jié)因子基因的cDNA克隆及其表達(dá)模式分析.pdf

1、MyoD，Myogenin，Myf5和MRF4是生肌調(diào)節(jié)因子(Myogenic regulatoryfactors，MRFs)家族的成員，其功能區(qū)都具有堿性螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)域(basichelix-loop-helix,bHLH)，即一個(gè)螺旋-環(huán)-螺旋基序(helix-loop-helix motif)及其上游的富含堿性氨基酸序列(basic region)。生肌調(diào)節(jié)因子蛋白以同源或異源二聚體形式與DNA上E-box序列(CANNTG

2、)結(jié)合而啟動(dòng)下游肌肉相關(guān)基因(如肌球蛋白輕鏈)的轉(zhuǎn)錄。魚類的生長(zhǎng)主要體現(xiàn)在體重的增加，體重的增加主要取決于肌肉生長(zhǎng)的速度，生肌調(diào)節(jié)因子作為一種轉(zhuǎn)錄因子在肌肉的生成過程中發(fā)揮重要作用。本研究克隆了斜帶石斑魚四種生肌調(diào)節(jié)因子MyoD，Myogenin，Myf5和MRF4的cDNA，分析了四種生肌調(diào)節(jié)因子在斜帶石斑魚各種組織以及胚胎發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)，并研究了饑餓及再投喂對(duì)四種生肌調(diào)節(jié)因子的表達(dá)影響，主要結(jié)果如下：
　　 1在斜帶石斑

3、魚中克隆得到了四種生肌調(diào)節(jié)因子(MyoD，Myogenin，Myf5和MRF4)的cDNA序列，通過氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，四種生肌調(diào)節(jié)因子在bHLH功能區(qū)域都非常保守，該區(qū)域大約由60個(gè)氨基酸組成。進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)，斜帶石斑魚的四種生肌調(diào)節(jié)因子都與魚類的相應(yīng)基因聚在一起，同源性分析顯示，MyoD和MRF4同源性較高，而MyoG和Myf5的同源性較高。
　　 2采用RT-PCR的方法研究了四種生肌調(diào)節(jié)因子在斜帶石斑魚14種組織的表達(dá)情

4、況，研究結(jié)果顯示，四種生肌調(diào)節(jié)因子主要分布在紅肌和白肌，在眼睛中都有微量表達(dá)，另外，MRF4和Myogenin在皮膚中也有少量表達(dá)。可以看出，四種生肌調(diào)節(jié)因子主要在肌肉中起作用。
　　 3采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法研究了四種生肌調(diào)節(jié)因子在斜帶石斑魚胚胎發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，四種生肌調(diào)節(jié)因子基本上都是在原腸胚期附近開始大量表達(dá)，其中，Myf5最先表達(dá)，隨后是Myogenin，MRF4和MyoD，說明它們的表達(dá)存在時(shí)間

5、差異。
　　 4采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法研究了饑餓及再投喂對(duì)斜帶石斑魚四種生肌調(diào)節(jié)因子的影響。結(jié)果顯示，斜帶石斑魚在饑餓前三周體重明顯下降，再投喂后體重增加明顯，并且相對(duì)體重增重率要高于對(duì)照組，表現(xiàn)出一定的補(bǔ)償生長(zhǎng)。MRF4的表達(dá)在饑餓第一周后就開始顯著升高，而Myf5，MyoD和Myogenin在饑餓第三周后表達(dá)顯著升高。再投喂一周，Myf5，MRF4和Myogenin的表達(dá)恢復(fù)到正常水平，而MyoD的表達(dá)仍然顯著高于對(duì)照