斜帶石斑魚腫瘤壞死因子α基因的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、腫瘤壞死因子（TNFα）是一種多效應(yīng)的前炎癥細(xì)胞因子，由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、肥大細(xì)胞及光滑肌細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生，在不影響正常細(xì)胞的前提下，于體內(nèi)外均能殺傷腫瘤細(xì)胞并抑制腫瘤細(xì)胞的增殖；參與和調(diào)控機(jī)體的免疫應(yīng)答，上調(diào)其他炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)，增強(qiáng)包括吞噬、化學(xué)趨化、反應(yīng)性氮氧物質(zhì)的產(chǎn)生等一系列細(xì)胞學(xué)反應(yīng)。 本文利用同源克隆和RACE方法從健康斜帶石斑魚頭腎組織中克隆得到了斜帶石斑魚TNFα全長cDNA序列和基因序列。斜

2、帶石斑魚TNFα的cDNA序列全長為1377bp，含有一個(gè)762bp的開放閱讀框，編碼253個(gè)氨基酸的蛋白。經(jīng)生物信息學(xué)分析，斜帶石斑魚TNFα是一種跨膜蛋白，具有潛在的蛋白酶切位點(diǎn)及對其三級結(jié)構(gòu)形成必需的2個(gè)半胱氨酸，也具有TNF家族的標(biāo)簽序列及5個(gè)炎癥細(xì)胞因子不穩(wěn)定基序ATTTA；進(jìn)化樹構(gòu)建結(jié)果表明：斜帶石斑魚TNFα與其他魚類TNFα占據(jù)進(jìn)化上獨(dú)立的分枝，且與已報(bào)道的鱸形總目魚類TNFα具有最近的親緣關(guān)系：空間結(jié)構(gòu)模擬顯示：斜帶石

3、斑魚TNFα與哺乳類TNFα的空間結(jié)構(gòu)相似，內(nèi)層與外層均由5個(gè)β折疊片結(jié)構(gòu)構(gòu)成。斜帶石斑魚TNFα基因長度為1801bp，由四個(gè)外顯子和三個(gè)內(nèi)含子組成，與其他魚類具有相似的結(jié)構(gòu)特征。 利用RealtimePCR技術(shù)，分析了TNFα在健康斜帶石斑魚各組織中的表達(dá)情況以及分裂素LPS、PolyI：C對斜帶石斑魚頭腎淋巴細(xì)胞TNFα基因表達(dá)的影響。定量結(jié)果顯示，TNFα在健康斜帶石斑魚各組織中呈組成型表達(dá)，在頭腎、脾、腎臟、鰓與下丘腦

4、等組織中均有較高表達(dá)，在腸道與肌肉組織中的表達(dá)量最低；研究還發(fā)現(xiàn)TNFα在垂體與下丘腦中以較高水平表達(dá)，尤以下丘腦最高，提示TNFα在神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中起著重要作用。分裂素LPS與PolyI：C刺激斜帶石斑魚頭腎淋巴細(xì)胞均能顯著誘導(dǎo)TNFα基因的表達(dá)，但二者的作用效果并不相同。經(jīng)LPS刺激后的淋巴細(xì)胞TNFα基因表達(dá)量在16h達(dá)到了最大，而PolyI：C刺激后的淋巴細(xì)胞TNFα基因表達(dá)量在檢測的24h內(nèi)一直在增大。 為了進(jìn)一步研究