云紋石斑魚與褐石斑魚的比較研究.pdf

1、本文從形態(tài)、細(xì)胞和分子水平對分類上存在混淆的云紋石斑魚(Epinephelus moara)和褐石斑魚(E. bruneus)進(jìn)行了比較研究，以澄清它們在分類上的疑問、弄清其遺傳背景并篩選可以鑒別兩者的特異性分子標(biāo)記，為云紋石斑魚和褐石斑魚的理論研究、生產(chǎn)實踐及種質(zhì)資源的保護(hù)提供重要資料。主要結(jié)果如下： 1.2種石斑魚的體形和體表橫帶等外部形態(tài)特征非常相似，但體表斑紋不同，F(xiàn)isher逐步判別法表明兩者在背鰭鰭條、鰓耙和幽門盲囊

2、等方面差異達(dá)到極顯著水平(p<0.001)。兩者骨骼系統(tǒng)均由腦顱、咽顱、脊柱、肋骨和附肢骨骼組成，主軸和附肢骨骼的形態(tài)結(jié)構(gòu)基本相同，但在腦顱的眶前骨和眶后骨、咽顱的前鰓蓋骨和尾舌骨、附肢骨骼的髓棘間骨及尾下骨與尾鰭鰭棘連接方式等方面存在差異，骨骼差異可作為屬間或種間的分類依據(jù)。結(jié)果確認(rèn)云紋石斑魚和褐石斑魚為為形態(tài)特征可以鑒別的2種石斑魚。 2.利用常規(guī)核型、Ag-NORs、C-帶、重復(fù)序列(5S rDNA、18S rDNA和(T

3、TAGGG)n)的熒光原位雜交技術(shù)分析了2種石斑魚的細(xì)胞遺傳學(xué)特性： 2種石斑魚二倍體染色體數(shù)目均為48，但單臂染色體和雙臂染色體個數(shù)不同，因此核型不同：云紋石斑魚為2n=48，4SM+44T(NF=52)；褐石斑魚為2n=48，2M+4SM+42T(NF=54)。銀染和FISH均顯示，云紋石斑魚和褐石斑魚中期分裂相中NORs的數(shù)目不同。Ag-NORs主要為4個和5個，分別位于2對(第9和24)和3對(第2、9和24)雙臂染色體

4、短臂或亞著絲粒區(qū)，種內(nèi)Ag-NORs數(shù)目和分布模式均具多態(tài)性；2種石斑魚18S rDNA的FISH雜交信號分別為4個和6個，位于雙臂染色體亞著絲粒區(qū)，不同染色體對雜交信號強(qiáng)弱不同。2種石斑魚均有1對5S rDNA雜交信號位于1對中等大小端部著絲粒染色體亞著絲粒位置。 2種石斑魚大多數(shù)染色體均具有著絲粒C-帶，有些同時還具有端粒C-帶；云紋石斑魚第9對染色體和褐石斑魚第2對染色體短臂相應(yīng)的Ag-NORs區(qū)均具有恒定異染色質(zhì)C-帶。

5、2種石斑魚大多數(shù)染色體著絲粒位置及部分染色體近端粒區(qū)呈DAPI陽性帶，與C-帶結(jié)果一致。2種石斑魚均僅在染色體的端粒位置而沒有在中間部位檢測到端粒序列(TTAGGG)n探針雜交信號，云紋石斑魚信號強(qiáng)度及大小比較均勻，而褐石斑魚染色體組有10對端部著絲粒染色體末端的端粒序列雜交信號強(qiáng)度和大小均明顯強(qiáng)于其它染色體上的雜交信號(約4倍以上)。結(jié)果顯示2種石斑魚具有較近的親緣關(guān)系，為石斑魚屬中的特化類群，在進(jìn)化上云紋石斑魚比褐石斑魚更原始。

6、 3.采用AFLP、RAPD及ISSR分子標(biāo)記分析了2種石斑魚遺傳多樣性。10對AFLP引物、30個RAPD引物和21個ISSR引物分別產(chǎn)生997、226和148條擴(kuò)增片段，多態(tài)位點百分比分別為36.31％、34.51％和27.03％；種間分化明顯，平均遺傳距離D分別為0.2987、0.3178和0.1792，Shannon's信息指數(shù)I分別為0.2247、0.2251和0.1753，遺傳分化系數(shù)Gst分別為0.7997、0.829

7、8和0.6460；種內(nèi)遺傳多樣性水平均不高，遺傳相似度S分別為0.9632和0.9630、0.9775和0.9691、0.9414和0.9769。mtDNA的16S rRNA、Cytb和ND2基因及核基因組中核糖體基因簇的ITS1區(qū)進(jìn)化分析均表明：石斑魚屬是石斑魚亞科中最新演化的類群，云紋石斑魚和褐石斑魚為石斑魚屬內(nèi)的近緣種。 將物種特異性的ISSR及RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化并獲得4個能鑒別2種石斑魚的穩(wěn)定SCAR標(biāo)記。選取ND2基因和