點(diǎn)帶石斑魚(yú)病毒性神經(jīng)壞死病研究.pdf

1、病毒性神經(jīng)壞死病(Viral nervous necrosis disease，VNN disease)為近年來(lái)我國(guó)沿海石斑魚(yú)養(yǎng)殖廠上極為嚴(yán)重的疾病，其致病原為神經(jīng)壞死病毒(NervousNecrosis Virus)，此病毒感染易造成石斑魚(yú)及幼魚(yú)的大量死亡，死亡率往往高達(dá)90％，造成我國(guó)石斑魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)極大的損失。該病毒為兩條單股RNA，分別為RNA1和RNA2，其中RNA1的功能為RNA-dependent RNA polymerase

2、(RdRp)，RNA2則可以轉(zhuǎn)錄翻譯出病毒的外殼蛋白。 本研究中，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RRT-PCR)等實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)近年來(lái)福建南部地區(qū)海水養(yǎng)殖點(diǎn)帶石斑魚(yú)暴發(fā)性的傳染病進(jìn)行調(diào)查和研究。闡明了該地區(qū)養(yǎng)殖石斑魚(yú)傳染病的主要種類(lèi)及其流行病學(xué)特征。病毒性神經(jīng)壞死病是該地區(qū)最常見(jiàn)、危害也最大的傳染病。該傳染病具有典型的神經(jīng)癥狀，游動(dòng)異常，中樞神經(jīng)和視網(wǎng)膜組織出現(xiàn)空泡壞死病變。病魚(yú)除了神經(jīng)異常外，無(wú)其它臨床癥狀，體表及體內(nèi)也

3、無(wú)明顯的病理變化或寄生蟲(chóng)寄生。該病可通過(guò)魚(yú)卵垂直傳播，也可經(jīng)養(yǎng)殖水體水平傳播。來(lái)自受感染親魚(yú)的垂直傳播是魚(yú)苗感染的主要途徑。各種石斑魚(yú)以及生長(zhǎng)階段的石斑魚(yú)均易感，但對(duì)幼體的危害更嚴(yán)重。 本試驗(yàn)建立了逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)點(diǎn)帶石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒(NNV)的檢測(cè)方法，并應(yīng)用到傳染病調(diào)查和廈門(mén)1:2岸進(jìn)出境魚(yú)類(lèi)病害檢疫中。同時(shí)，用組織切片法對(duì)石斑魚(yú)腦部和視網(wǎng)膜的特征性病變進(jìn)行觀察驗(yàn)證，也說(shuō)明該檢測(cè)方法具有良好的特異性

4、和敏感性，能夠檢測(cè)到Pg級(jí)的核酸量。證明該方法是一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。應(yīng)用該方法對(duì)廈門(mén)地區(qū)海域十幾種海洋魚(yú)類(lèi)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)了有些蘭子魚(yú)，黃鰭鯛呈陽(yáng)性。說(shuō)明廈門(mén)海區(qū)神經(jīng)壞死病毒主要感染石斑魚(yú)類(lèi)及少量其它魚(yú)類(lèi)。 采用TaqMan探針技術(shù)，并且將假病毒技術(shù)構(gòu)建的含有神經(jīng)壞死病毒RNA2基因組的MS2噬菌體假病毒作為陽(yáng)性質(zhì)控品，建立了TaqMan探針檢測(cè)點(diǎn)帶石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒的熒光定量PCR方法，對(duì)影響PCR反應(yīng)的Mg<'2+

5、>濃度和退火溫度等條件進(jìn)行了優(yōu)化，并建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，能夠在檢測(cè)中病毒檢測(cè)中進(jìn)行絕對(duì)定量，最低能檢測(cè)10個(gè)病毒，在實(shí)際檢測(cè)運(yùn)用中取得很好的效果。 本文還首次測(cè)定了點(diǎn)帶石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒(MCNNV)RNA1和RNA2基因組的全序列。RNA1由3103個(gè)核苷酸組成，含有一個(gè)編碼982個(gè)氧基酸的開(kāi)放閱讀框，分子量為110.40 kD．；RNA2由1433個(gè)核苷酸組成，含有一個(gè)編碼338個(gè)氨基酸的開(kāi)放閱讀框，分子量為37.06 kD。對(duì)