3種重要經(jīng)濟(jì)頭足類微衛(wèi)星標(biāo)記的分離及特性研究.pdf

1、長蛸(Octopus minor)、真蛸(Octopus vulgaris)、萊氏擬烏賊(Sepioteuthislessoniana)是經(jīng)濟(jì)頭足類,其肉嫩味美、營養(yǎng)豐富,是深受世界各地人們喜愛的美食。近年來,生存環(huán)境的破壞、過度捕撈等使其自然資源遭到破壞。因此,開展種群遺傳結(jié)構(gòu)調(diào)查對其資源保護(hù)具有極其重要的意義。微衛(wèi)星標(biāo)記以其共顯性,高多態(tài)性等特點(diǎn)成為研究遺傳結(jié)構(gòu)和生物進(jìn)化的有力工具。本研究應(yīng)用磁珠選擇法從基因組中分離了3種頭足類的微

2、衛(wèi)星位點(diǎn),共獲得微衛(wèi)星序列230條,分析其多態(tài)性,并向GenBank提交微衛(wèi)星序列53條。
　　目前,頭足類中微衛(wèi)星位點(diǎn)的開發(fā)工作還處在起步階段,長蛸、萊氏擬烏賊的微衛(wèi)星位點(diǎn)未見報道,而真蛸也只有Greatorex等(2000)開發(fā)的6個位點(diǎn),這遠(yuǎn)不能滿足頭足類種質(zhì)資源調(diào)查和遺傳多樣性研究的需要。本實(shí)驗(yàn)采集山東榮成(37.16°N,122.41°E)的長蛸,福建霞浦(26.89°N,120.00°E)的真蛸,海南陵水(18.48°

3、N,110.02°E)的萊氏擬烏賊野生個體,應(yīng)用磁珠雜交富集法進(jìn)行了微衛(wèi)星位點(diǎn)的分離。從長蛸富集文庫中PCR篩選625個菌落,挑取115個克隆測序,最后設(shè)計(jì)了50對引物,經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠檢測獲得12個多態(tài)性微衛(wèi)星位點(diǎn);篩選真蛸250個菌落,挑取70個克隆測序,設(shè)計(jì)55對引物,最后篩選出17個多態(tài)性位點(diǎn);挑取360個萊氏擬烏賊菌落進(jìn)行PCR篩選,送97個克隆測序,共設(shè)計(jì)引物52對,24個位點(diǎn)具有多態(tài)性。
　　采集野生群體檢測其多態(tài)性

4、,等位基因數(shù)目、觀測雜合度、期望雜合度等參數(shù)被用來評估每個位點(diǎn)的多態(tài)性水平。長蛸12個位點(diǎn)中,等位基因數(shù)為2-11,平均值為5.4;觀測雜合度為0.200-1.000,平均0.635;期望雜合度為0.235-0.869,平均0.630。真蛸17個位點(diǎn)中,等位基因數(shù)位3-17,平均值為8.5;觀測雜合度0.154-1.000,平均0.809;期望雜合度為0.214-0.925,平均0.750。萊氏擬烏賊24個位點(diǎn),等位基因數(shù)為4-26,平