鯉魚、中華絨鰲蟹和大黃魚微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)與應(yīng)用研究.pdf

1、近年來，我國的水產(chǎn)養(yǎng)殖動物普遍存在生產(chǎn)性能下降、抗逆性差、種質(zhì)衰退和混雜等問題，這些問題已成為嚴(yán)重影響水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的制約因素。本研究以鯉(Cyprinuscarpio)、中華絨鰲蟹(Eriocheirsinensis)和大黃魚(Pseudosciaenacrocea)作為研究對象，以共顯性微衛(wèi)星分子標(biāo)記作為研究手段，對微衛(wèi)星標(biāo)記在連鎖圖譜構(gòu)建、種質(zhì)鑒定、遺傳衰退評估和分子標(biāo)記輔助育種等研究領(lǐng)域應(yīng)用的可行性進行了摸索與探討。

2、 通過小片斷克隆法、生物素-磁珠選擇性雜交、檢索鯉EST序列、篩選鯉SSH-cDNA文庫、借用斑馬魚微衛(wèi)星標(biāo)記及收集公開發(fā)表的鯉微衛(wèi)星標(biāo)記等開發(fā)策略，共獲得鯉SSR多態(tài)性標(biāo)記1682個。選用700個標(biāo)記對鯉雌核發(fā)育家系進行多態(tài)性篩選，結(jié)果有287個標(biāo)記的遺傳模式符合遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建要求。結(jié)合AFLP和RAPD標(biāo)記構(gòu)建鯉雌核發(fā)育F2遺傳連鎖圖譜。結(jié)果這3類標(biāo)記中共有445個標(biāo)記發(fā)生連鎖，分布于50個連鎖群，其中RAPD標(biāo)記16個，AF

3、LP標(biāo)記265個，微衛(wèi)星標(biāo)記164個，連鎖群長度從9.39cM到208.75cM，每個連鎖群含2-32個標(biāo)記。圖譜長度為3732.52cM，各連鎖群平均圖距在4.65到29.19cM之間，總平均圖距為11.19cM。鯉遺傳圖譜的預(yù)期長度為4803.39cM，圖譜的覆蓋率為77.71％。 利用生物素-磁珠選擇性雜交和放射性同位素輔助篩選的方法克隆了中華絨鰲蟹的SSR標(biāo)記，結(jié)果從85對SSR引物中獲得多態(tài)性標(biāo)記39個，另收集公開發(fā)表

4、的中華絨鰲蟹標(biāo)記12個，共獲得絨鰲蟹多態(tài)性標(biāo)記51個。利用其中的25個標(biāo)記對來自江蘇和安徽良種場、天津和遼寧私人養(yǎng)殖場的4個群體進行了遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)分析。遺傳多樣性檢測顯示4個群體的觀察雜合度是0.5789-0.6824，來自良種場兩個群體的雜合度均高于養(yǎng)殖場，近交系數(shù)低于養(yǎng)殖場。遺傳結(jié)構(gòu)分析表明，雖然4個分析群體的遺傳分化較弱(Fst值為0.103)，屬于同一個物種，但是基于遺傳距離的UPGMA聚類圖顯示，來自江蘇、安徽和天津的

5、3個絨鰲蟹群體聚在一起，而來自遼寧的遼河蟹個體單獨聚為一支。個體混雜檢測表明，長江蟹中已混雜有其它水系的絨鰲蟹。 利用生物素一磁珠選擇性雜交和放射性同位素輔助篩選的方法克隆了大黃魚的SSR標(biāo)記，結(jié)果從35對SSR引物中獲得多態(tài)性標(biāo)記11個，另收集公開發(fā)表的大黃魚標(biāo)記6個，共獲得大黃魚多態(tài)性SSR標(biāo)記17個。利用其中的15個標(biāo)記首次對人工繁殖大黃魚群體的F2和F3連續(xù)兩代8個群體250個樣品進行了遺傳差異分析。遺傳多樣性檢測顯示，

6、F2的4個群體的觀察雜合度均高于F，表明連續(xù)累代繁殖已造成大黃魚養(yǎng)殖群體遺傳多樣性的下降。等位基因頻率分析顯示有53.0-66.5％的等位基因頻率低于0.05，說明低頻等位基因的丟失可能是造成養(yǎng)殖大黃魚群體遺傳多樣性下降的主要原因。經(jīng)過一代繁育，F(xiàn)2和F3在等位基因頻率上存在34.13％的遺傳差異，遺傳分歧增加約1％，進一步表明連續(xù)累代繁殖降低了大黃魚的遺傳可塑性。因此，十分有必要對大黃魚繁育親本進行遺傳篩查，執(zhí)行已遺傳管理為指導(dǎo)的繁育