大黃魚標志技術研究及耐低溫性狀相關SSR標記篩選.pdf

1、大黃魚是我國重要的海洋經(jīng)濟魚類，由于酷漁濫捕，大黃魚資源嚴重枯竭，已到了瀕臨滅絕的地步，目前我國大黃魚種質(zhì)面臨著生長變緩，抵抗力變差，耐受性變?nèi)?，個體變小和性成熟提早等各種種質(zhì)退化的問題，大黃魚在浙江地區(qū)無法自然過冬對浙江大黃魚養(yǎng)殖業(yè)造成致命打擊，大黃魚種質(zhì)資源改良選育迫在眉睫。本研究通過群體選育方法，以岱衢洋大黃魚幼魚（耐低溫品系F2代儲備親魚）為研究對象，初步探索了熒光和PIT兩種傳統(tǒng)標志技術對大黃魚生長狀況的影響，得到了較優(yōu)標志方

2、法。另一方面，對耐低溫品系F2代儲備親魚進行人工低溫脅迫實驗，初步篩選出F2代大黃魚耐低溫群體，利用微衛(wèi)星標記技術，對低溫耐受群體和非耐受群體進行遺傳多樣性比較分析，并篩選出1個與耐低溫性狀相關的微衛(wèi)星標記位點。通過傳統(tǒng)標志技術和現(xiàn)代化基因標記技術手段的結(jié)合研究，為耐低溫品系后續(xù)的大黃魚群體選育及培育研究提供了較優(yōu)的標志方法和高效的分子標記檢測手段。主要研究內(nèi)容及成果如下:
　　1、大黃魚VIE與PIT標志的初步研究
　　群

3、體選育目標群體較多，在群體數(shù)量較多時（大于兩個群體），標志技術的使用不僅可有效保證選育外界環(huán)境一致，保證選育結(jié)果的有效性，還可以減少所使用的養(yǎng)殖設施和人工成本，降低選育工作強度，提高效率。2013年4月，通過對樣本大黃魚進行VIE標和PIT標處理，每組400尾，設置空白對照組（無標志、400尾），共3組1200尾大黃魚。結(jié)果顯示:VIE與PIT對大黃魚的體重、體長生長狀況影響均無顯著差異(P＞0.05)。而在成活率的比較中，VIE比PI

4、T標志表現(xiàn)結(jié)果好且差異顯著(P＜0.05)，兩者脫標率均較低且無顯著差異(P＞0.05)。VIE標志對大黃魚的存活生長影響比PIT小，前者操作簡易、成本較低，僅不到后者12.5％，因此，本試驗后期工作均采用VIE標記大黃魚。
　　2、遺傳多樣性分析及耐低溫性狀相關SSR標記的篩選
　　2013年1月對3000余尾體長9.2～11.5cm岱衢洋大黃魚幼魚進行人工低溫脅迫實驗，以低溫耐受組和非低溫耐受組2個F2代群體各50個個體

5、為研究對象，分析了群體耐低溫性狀的遺傳差異。結(jié)果顯示:13個微衛(wèi)星標記位點在2個岱衢洋大黃魚群體中共檢測到109個等位基因，觀測等位基因85個，平均有效等位基因6.49個，觀測雜合度0.89，平均期望雜合度0.85，2個群體的平均多態(tài)信息含量值為0.81，全部為高度多態(tài)，表明13個微衛(wèi)星位點在所選育的岱衢洋大黃魚群體中均表現(xiàn)出較高的多態(tài)性，群體的遺傳多樣性比較豐富，可以作為良好的育種材料。耐低溫性狀相關微衛(wèi)星標記的研究顯示，標記LYC0

6、015在兩組樣品中共擴增出5個等位基因(片段大小分別為112、110、108、106和104 bp)，其中LYC0015112bp等位基因在低溫耐受組的出現(xiàn)頻率達48％，而在正常對照組中的頻率為零，表明該等位基因?qū)︶丰檠蟠簏S魚溫度特性較為敏感，可能與某種耐低溫基因存在一定的連鎖關系，這一結(jié)果可以為岱衢洋大黃魚今后耐低溫群體的選育研究提供基礎資料。本研究對研究所培育的耐寒和非耐寒群體遺傳多樣性SSR分析結(jié)果表明，2個大黃魚養(yǎng)殖群體的多態(tài)信