北沙參種子質量標準的制定及RAPD分子標記鑒別的研究.pdf

1、北沙參為多年生草本植物，具有較高的營養(yǎng)、保健及藥用價值。因其為異花授粉植物，野生與栽培群體中存在著豐富的遺傳變異，同時由于北沙參藥材長期人工栽培，種子種苗提純、復壯工作滯后，變異退化，嚴重影響了道地藥材的質量穩(wěn)定。目前北沙參的品種分類研究仍限于形態(tài)學、解剖學的方法，有關北沙參在DNA水平上的分類研究尚未見報道。本實驗以北沙參為材料，從制定種子質量標準、DNA提取、RAPD的反應體系與PCR擴增條件建立以及運用RAPD技術對北沙參主要栽培

2、品種進行系統(tǒng)聚類分析，并進行品種種類的劃分和分子鑒別方面進行了探討。
　　 1、本實驗通過觀察種子的外部形態(tài)特征，測定不同產地的北沙參種子凈度、千粒重、含水量、發(fā)芽率，并據此初步制定了北沙參種子的質量分級標準。
　　 2、本實驗利用北沙參葉片DNA來進行RAPD分析，共6個樣品。采用CTAB法從葉片中直接提取DNA，然后將其溶于TE緩沖液中，利用紫外分光光度計法和瓊脂糖凝膠電泳法檢測提取樣品基因組DNA的濃度和純度。結果

3、表明:所提取的北沙參葉片基因組DNA濃度和純度都很高，無論在質量上還是完整性上都符合RAPD分析的需要。
　　 3、本實驗研究了RAPD的影響因素，從而確立了一套優(yōu)化的北沙參RAPD反應體系和PCR擴增條件，即模板DNA32ng/μl，隨機引物1.0μmol/L，dNTPs0.25mmol/L,Mg2+2.5mmol/L，Taq聚合酶1U。其熱力學參數為:94℃預變性3min，之后進行40個循環(huán)（94℃變性30s，36℃退火60