大豆無(wú)茸毛性狀的遺傳分析與分子標(biāo)記研究.pdf

1、大豆是世界上最重要的糧油兼用作物，中國(guó)是大豆的起源地和重要產(chǎn)地。分子標(biāo)記的發(fā)展為大豆理論和應(yīng)用研究帶來(lái)了重大突破，廣泛應(yīng)用于大豆分子遺傳圖譜構(gòu)建，分子標(biāo)記輔助選擇，遺傳多樣性及遺傳距離分析，品種鑒別等各個(gè)方面。SSR標(biāo)記均勻、隨機(jī)、廣泛地分布于大豆基因組，比RFLP及RAPD分子標(biāo)記更具有多態(tài)性，呈孟德?tīng)柺竭z傳，共顯性等特點(diǎn)。 茸毛是植物葉、莖、根和根表皮層的單細(xì)胞或多細(xì)胞的外生物，目前對(duì)植物茸毛性狀的研究主要集中在棉花、番茄、

2、茶葉等作物上面，對(duì)大豆茸毛的研究很少?，F(xiàn)在已有人育成表現(xiàn)優(yōu)良、用于做毛豆的無(wú)茸毛大豆新品種。為了探討大豆無(wú)茸毛性狀的遺傳規(guī)律及尋找與大豆無(wú)茸毛性狀連鎖的分子標(biāo)記，加快無(wú)茸毛性狀的利用進(jìn)程。 1、本研究以有茸毛親本吉林38、吉林36和吉科豆1號(hào)、無(wú)茸毛親本旱生裸配制雜交組合。F<,1>代表現(xiàn)為無(wú)茸毛，對(duì)F<,2>代分離群體的分析結(jié)果表明，大豆無(wú)茸毛性狀和有茸毛性狀的性狀分離符合3:1的分離比率，大豆無(wú)茸毛性狀和有茸毛性狀是由一對(duì)等

3、位基因控制的。在表現(xiàn)無(wú)茸毛性狀的大豆純合體中無(wú)茸毛性狀由一對(duì)顯性基因控制，在表現(xiàn)有茸毛性狀的大豆純合體中有茸毛性狀由一對(duì)隱性基因控制。大豆中無(wú)茸毛性狀對(duì)有茸毛性狀為完全顯性，有茸毛性狀為隱性性狀。 2、利用混合分離分析法篩選出與無(wú)茸毛性狀相關(guān)的分子標(biāo)記。通過(guò)田間表型觀察，取10個(gè)無(wú)茸毛的大豆單株和10個(gè)有茸毛的大豆單株提取DNA，等量混合后形成無(wú)茸毛DNA池和有茸毛DNA池。從F<,2>群體中隨機(jī)選取40個(gè)單株，利用有差異的引物

4、進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在兩個(gè)親本和兩個(gè)DNA池間表現(xiàn)出有差異SSR.標(biāo)記Sat_020與無(wú)茸毛性狀連鎖，進(jìn)一步用其所在的K連鎖群上Sat_020附近的SSR標(biāo)記對(duì)親本、有茸毛池和無(wú)茸毛池進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)多態(tài)性標(biāo)記Sat_126，利用Sat_020和Sat_126對(duì)F<,2>代群體122個(gè)單株進(jìn)行了SSR分析，并構(gòu)建連鎖圖譜，無(wú)茸毛基因與標(biāo)記Sat_126和Sat_020的遺傳距離分別為3.6cM和10.8cM。 3、對(duì)SSR-PCR擴(kuò)增反

5、應(yīng)體系和擴(kuò)增程序進(jìn)行了優(yōu)化。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4min，然后94℃變性45s，55℃退火45s，72℃延伸1min，共40次循環(huán)，最后一個(gè)循環(huán)72℃延伸10min，最后4℃保存。每一反應(yīng)體系的總體積為25ul，由10×PCRbuffer(25mmol/L)2.5ul，Taq酶(2U/ul)0.5ul，dNTPs(10mmol/L)0.4ul，引物(16.8umol/L)各1ul，模板 DNA(10ng/ul)4ul，滅菌去離