獺兔毛囊發(fā)育規(guī)律及不同被毛密度獺兔皮膚組織差異基因的篩選.pdf

1、本研究旨在探討獺兔毛囊發(fā)育過程:描述胚胎時期，不同胎齡獺兔毛囊發(fā)育規(guī)律;對出生后4d以及胚胎期24d的不同被毛密度的獺兔皮膚進行差異基因的篩選。研究結(jié)果如下:
　　(1)選取正常生長母獺兔8只，選用同一只種公兔進行配種，以配種當天為第0天。分別在胚胎時期19d、20d、21d、22d、23d、24d、25d、26d，取胚胎兔臀部皮膚，通過HE染色方法，研究不同胚胎期獺兔毛囊的發(fā)育規(guī)律;以GAPDH為內(nèi)參基因，利用Q-RT-PCR檢

2、測生長激素受體(GHR)、成纖維細胞生長因子5(FGF5)基因在不同胎齡毛囊中的表達量。HE染色結(jié)果顯示:獺兔胚胎期毛囊發(fā)育主要集中在20～25胎齡;19胎齡時毛囊發(fā)育未啟動，20、21胎齡時開始出現(xiàn)毛囊釘球，但數(shù)目稀少;22胎齡時出現(xiàn)較多的毛囊釘球，基板增厚;23、24胎齡時毛囊發(fā)育最活躍，毛乳頭長度大于寬度并且毛囊內(nèi)根鞘向上延伸;25胎齡時毛囊基本發(fā)育成型。熒光定量結(jié)果顯示:不同胎齡GHR基因表達差異極顯著(P＜0.0001)，呈現(xiàn)

3、由低到高、然后降低的趨勢;不同胎齡FGF5基因表達無差異表達(P=0.6644)，基因表達倍數(shù)趨勢平穩(wěn)。
　　(2)選取成年被毛密度高的母獺兔（被毛密度＞14000根/cm2）、成年被毛密度低的母獺兔（被毛密度＜10000根/cm2）各四只，分成兩組，選用同一只種公兔進行配種。于出生后4d時，每只母兔隨機選取4只仔獺兔，割取臀部皮膚，利用家兔全基因組芯片篩選不同被毛密度獺兔差異基因，并運用聚類及功能注釋對芯片檢測結(jié)果進行分析。結(jié)果

4、顯示:本試驗共篩選出188個與獺兔被毛密度相關(guān)的差異基因，表達上調(diào)的基因有72個，其中包含24個已知功能的基因，表達下調(diào)的基因116個，其中包含38個已知功能的基因。GO分類顯示，大部分差異基因位于細胞質(zhì)膜、細胞外區(qū);屬于氧化還原酶、特定細胞因子類分子;主要涉及氧化還原、脂代謝分解等生物學(xué)過程。KGGE通路分析顯示，篩選的差異基因主要參與了WNT信號通路、PPAR信號通路、維生素合成與代謝途徑等。Q-RT-PCR結(jié)果與基因芯片結(jié)果基本吻

5、合，基因芯片結(jié)果可靠。
　　(3)選取成年被毛密度高的母獺兔（被毛密度＞14000根/cm2）、成年被毛密度低的母獺兔（被毛密度＜10000根/cm2）各四只，分成兩組，選用同一只種公兔進行配種，以配種當天為第0天，于胚胎時期24d時屠宰母兔，每只母兔隨機選取4只胚胎獺兔，割取臀部皮膚，利用家兔全基因組芯片篩選不同被毛密度獺兔差異基因，并運用聚類及功能注釋對芯片檢測結(jié)果進行分析。結(jié)果顯示:本試驗共篩選出1342個與獺兔被毛密度相關(guān)

6、的差異基因，表達上調(diào)的基因有950個，其中包含350個已知功能的基因，表達下調(diào)的基因392個，其中包含164個已知功能的基因。GO分類顯示，大部分差異基因位于細胞膜、細胞質(zhì)膜;屬于受體、DNA結(jié)合類分子;主要涉及G蛋白耦合受體信號通路、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、運輸?shù)壬飳W(xué)過程。KGGE通路分析顯示，篩選的差異基因主要參與了Shh信號通路、Eph信號通路、幾種氨基酸（如脯氨酸、精氨酸、色氨酸等）代謝、亞油酸代謝、維生素合成與代謝途徑以及鈣信號通路等