囊型肝包蟲(chóng)囊周肝組織與正常肝組織差異基因與差異蛋白的初步篩選及研究.pdf

1、目的：(1)以綿羊自然發(fā)病肝包蟲(chóng)病例為研究對(duì)象,對(duì)該病例進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察及分期。為臨床治療和防治肝包蟲(chóng)病提供理論參考依據(jù)。(2)探討囊型肝包蟲(chóng)囊周肝組織與正常肝組織的差異表達(dá)基因。(3)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法,建立人肝包蟲(chóng)囊周肝組織及正常肝組織的二維電泳圖譜,篩選囊周肝組織與正常肝組織間差異表達(dá)蛋白,期望得到肝包蟲(chóng)發(fā)生發(fā)展相關(guān)蛋白。 方法：(1)采用石蠟包埋、切片、HE染色法對(duì)40例自然發(fā)病肝包蟲(chóng)綿羊進(jìn)行鏡檢,分析結(jié)果。(2)取囊型

2、肝包蟲(chóng)病人囊周肝組織與正常肝組織,應(yīng)用抑制差減雜交技術(shù)構(gòu)建正、反向差減雜交文庫(kù)。經(jīng)酶切鑒定存在表達(dá)差異的陽(yáng)性克隆送去測(cè)序,測(cè)序結(jié)果Sequence Scanner V1.0去除酶切位點(diǎn),再經(jīng)B1axtn和Genbank公共數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)。(3)收集術(shù)后新鮮肝包蟲(chóng)囊周肝組織和距包囊5厘米以上正常肝組織保存于液氮中備用。提取組織總蛋白,采用雙向凝膠電泳(2-DE)技術(shù)得到各組凝膠圖譜。 結(jié)論：(1)根據(jù)綿羊肝包蟲(chóng)病理發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸

3、不同,可將肝包蟲(chóng)的病理改變過(guò)程分為兩種類型。其一：肝竇擴(kuò)張期、炎細(xì)胞滲出期、肉芽腫形成期、匯管區(qū)周圍纖維組織增生期、囊腫形成期。其二：肝竇擴(kuò)張期、炎細(xì)胞滲出期、肉芽腫形成期、壞死期、膿腫灶形成期,膿腫液被吸收、消散、形成鈣化灶。并依其疾病的發(fā)展程度,將肝竇擴(kuò)張期、炎細(xì)胞滲出期歸為輕度,肉芽腫期、匯管區(qū)周圍纖維組織增生期歸為中度,囊腫形成期歸為重度。(2)共篩選出陽(yáng)性克隆306個(gè),其中正向差減文庫(kù)陽(yáng)性克隆292個(gè),反向差減文庫(kù)陽(yáng)性克隆14