侵染勝紅薊和假馬鞭的雙生病毒的分子鑒定.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文侵染勝紅薊和假馬鞭的雙生病毒的分子鑒定姓名：范三微申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：周雪平2003.5.1塑望奎堂堡圭蘭垡鯊j ∑—————————————一摘 要本研究對(duì)侵銎勝窒[ 塑( A g e r a t “，' lc o n y z o i d e s ) 和! ! ! 燮( S t a c h y t a r p h e t a j a m a i c e n s i s )的

2、雙生病毒進(jìn)行了分子鑒定，并獲得如下結(jié)果：+- - I ●_ _ _ - _ ‘a(chǎn) 。一利用三抗體夾心E L I S A ( T A S —E L I S A ) 及P C R 檢測(cè)的方法對(duì)采白海南的勝紅薊( A g e r a t u 腳c o n y z o i d e s ) 和假馬鞭( S t a c h y t a r p h e C aj a m a i c e n s i s ) 的5 個(gè)病樣進(jìn)行了檢測(cè)，表明均為粉虱傳雙生病

3、毒。P C R 擴(kuò)增產(chǎn)物克隆后進(jìn)行序列測(cè)定，結(jié)果表明存在兩類雙生病毒，其中樣品H n 2 存在兩類病毒的復(fù)合侵染。這是在海南首次報(bào)道存在有粉虱傳雙生病毒。在此基礎(chǔ)上我們對(duì)勝紅薊和假馬鞭上W T G s 基因組進(jìn)行了研究。， ／從勝紅薊樣本H n 2 中克隆并測(cè)定了兩個(gè)O N A —A 全序列( H n 2 一l 和H n 2 —1 9 ) ，經(jīng)N C B I檢索和序列比較分析發(fā)現(xiàn)，H n 2 - t 除與勝紅薊黃脈病毒( A Y V V

4、 ，基因登錄號(hào)X 7 4 5 1 6 )有8 5 ．6 ％的同源性外，其余均在8 5 ．0 ％以下。根據(jù)雙生病毒全基因組核營(yíng)酸序列同源性小于8 9 ％為不同病毒的原則，我們將這些病毒分離物命名為中國(guó)勝紅薊黃脈病毒，英文名為A g e r a t u m y e l l o w v e i nC h i n a v i r u s ( A Y V C N V ) 。H n 2 —1 9 和H n 2 —1 為H n 2 樣品中擴(kuò)增到的不同

5、分子，其基因組序列同源性高達(dá)9 7 ．7 ％，這表明H n 2 中存在同種雙生病毒的不同分離物的復(fù)合侵染。從假馬鞭樣本H n 5 和H n 6 中克隆并測(cè)定了三個(gè)D N A —A 全序列( H n 5 ．4 、H n 5 ．1 和H n 6 - 1 ) ，經(jīng)N C B I 檢索和序列比較分析發(fā)現(xiàn)，H n 5 ．1 、H n 5 ．4 和H n 6 ．1 基因組均與亞洲報(bào)道的粉虱傳雙生病毒的基因組同源性最高。H n 5 ．4 、H n 5

6、 ．1 和H n 6 ．1 3 個(gè)序列闖同源性> 9 5 ％，與印度尼西亞報(bào)道的番茄曲葉病毒( T o L C V ，基因登錄號(hào)A B l 0 0 3 0 5 ) 的同源性最高，為8 1 ．5 ％。根據(jù)雙生病毒分類命名原則，H n 5 ．1 、H a 5 ．4 和H n 6 ．1 為同種病毒的不同分離物，我們將這些病毒分離物命名為假馬鞭曲葉病毒( S t a c h y t a r p h e t a l e a t “ c u