侵染一串紅的蠶豆萎蔫病毒2號(hào)的分子鑒定.pdf

1、目的：一串紅（Salvia splendens）觀賞價(jià)值高，是城市和園林中普遍栽培的草本花卉。在石河子觀察到一些葉片花葉、植株矮化、花序減少、變小，提前枯死的一串紅，降低觀賞價(jià)值。本研究論文對(duì)病原進(jìn)行檢測(cè)鑒定，明確其病原病毒及分子特性，為進(jìn)一步控制該病害提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：采集表現(xiàn)花葉的一串紅樣品，在防蟲溫室中接種測(cè)試寄主觀察癥狀表現(xiàn)和提取dsRNA初步確定病毒類型；以dsRNA/RNA為模板，合成特異性引物進(jìn)行RT-PCR

2、、克隆、序列測(cè)定和分析，明確其分子特性。
　　結(jié)果：在防蟲溫室摩擦接種3科5種植物，在心葉煙、三生煙、假酸漿、雞冠花、蠶豆產(chǎn)生明顯的局部或系統(tǒng)性癥狀，經(jīng)過(guò)篩選獲得S4分離物。提取S4分離物的dsRNA，得到大小約4700bp和6300bp的片段，以此dsRNA為模板，用蠶豆病毒屬（Fabavirus）的兼并引物進(jìn)行RT-PCR，擴(kuò)增得到一條約400bp片段，序列測(cè)定片段長(zhǎng)為391nts，NCBI中經(jīng)blast比對(duì)，與蠶豆萎蔫病毒2

3、號(hào)（Bean broad wilt virus2，BBWV2）的相似性為78％?100%，表明S4分離物為BBWV2。設(shè)計(jì)合成特異性引物，以S4分離物的總RNA為模板分段進(jìn)行RT-PCR，PCR產(chǎn)物經(jīng)回收、克隆和測(cè)序，得到S4分離物RNA1基因組全序列為5957nt(不包括 poly A)，編碼一個(gè)大的開(kāi)放閱讀框（Open reading frame，ORF）；序列相似性結(jié)果表明，S4分離物與已報(bào)道 BBWV2的RNA1序列相似性在78

4、.4%?100.0%，與來(lái)自同一地區(qū)辣椒分離物XJP1-1序列同源性為100%?；蚪MRNA2大小為3618個(gè)核苷酸(不包括poly A)，同樣編碼一個(gè)大的開(kāi)放閱讀框（ORF），與BBWV2的RNA2序列相似性在80.4%?93.0%，其中與中國(guó)新疆的辣椒分離物XJP1-1同源性最高，達(dá)93.0%，而與來(lái)自同一地區(qū)加工番茄分離物XJ14-3a的同源性最低，僅為80.4%。
　　結(jié)論：通過(guò)本文的研究，初步明確了石河子地區(qū)一串紅花葉病