侵染廣東辣椒的病毒種類鑒定及病毒病藥劑防控效果評價.pdf

1、辣椒是我國重要的經(jīng)濟作物，病毒病是我國辣椒生產(chǎn)上主要病害之一，已鑒定出侵染為害我國辣（甜）椒的病毒有28種。廣東省是我國主要辣椒種植區(qū)之一，病毒病為害也十分嚴重，但目前還沒有對為害廣東省辣椒的病毒種類進行系統(tǒng)調(diào)查與鑒定。本論文對廣東辣椒8個主要種植區(qū)進行了調(diào)查與病樣采集，應用小RNA深度測序及RT-PCR檢測技術(shù)，鑒定出侵染廣東辣椒的病毒種類；克隆與序列分析了辣椒葉脈斑駁病毒（Chilli veinal mottle virus，Chi

2、VMV）基因組全序列，測定了其致病性；評價了16種植物病毒藥劑對辣椒病毒病的防治效果。取得以下研究結(jié)果：
　　1.在廣東省茂名、梅州、韶關(guān)、佛山、廣州、惠州、江門和湛江等8個辣椒種植區(qū)進行調(diào)查，辣椒病毒病在這些產(chǎn)區(qū)均有不同程度的發(fā)生與為害，田間病株率一般為5％~30%，嚴重可達100%。田間病株癥狀以花葉為主，同時伴有葉片畸形、皺縮、泡狀突起等。
　　2.應用小RNA深度測序及比較分析鑒定出辣椒病樣中病毒的種類，從茂名、梅州

3、和韶關(guān)這3個地區(qū)的7個混合病樣品檢測到18種病毒，包括辣椒輕斑駁病毒（PMMoV）、甜椒（辣椒）內(nèi)源病毒（BPEV）、煙草輕型綠花葉病毒（TMGMV）、辣椒葉脈斑駁病毒（ChiVMV）、甜椒脈斑駁病毒（PVMV）、黃瓜花葉病毒（CMV）、辣椒黃化卷葉病毒（PYLCV）、辣椒環(huán)斑病毒（ChiRSV）、馬鈴薯 Y病毒（PVY）、辣椒褪綠病毒（CaCV）、蠶豆萎蔫病毒（BBWV-2）、辣椒隱癥病毒（PCV）、甜菜西方黃化病毒（BWYV）和煙草

4、脈明病毒（TVCV）、Pepper veinyellowsvirus（PeVYV）、Nicotiana tomentosiformis endogenous pararetrovirus（NtoEPRVs）、Gloxinia tospovirus（Glotospov）。根據(jù)小RNA深度測序結(jié)果及GenBank上已登錄的相應病毒基因組序列，分別對每種病毒設計2對引物，對測序用的病樣進行RT-PCR檢測與驗證，成功地檢測到16種病毒的目的片

5、段，僅TVCV和LycEPRVs未檢測到。上述16種病毒中，PYLCV、BWYV、PeVYV、Glotospov、NtoEPRVs等5種病毒侵染辣椒是中國大陸首次報道，其余11種侵染辣椒在國內(nèi)已有報道。廣東優(yōu)勢病毒為PVMV、ChiVMV、PVY、PMMoV及PeVYV。
　　3.從每種病毒的2對引物中篩選出1對擴增效果較好的引物，對佛山、廣州、惠州、江門、梅州、湛江、茂名、南雄等地125份辣椒病毒病疑似病樣進行RT-PCR檢測，

6、結(jié)果顯示，124份樣品為陽性，共檢測出18種病毒。根據(jù)檢出率依次為NtoEPRVs（57%）、PMMoV（44%）、BPEV（33%）、TMGMV（31%）、ChiVMV（30%）、PVMV（30%）、PeVYV（26%）、CMV（18%）、PYLCV（17%）、ChiRSV（17%）、PVY（15%）、CaCV（14%）、BBWV-2（10%）、Glotospov（10%）、PeCPV（9%）、TMV（4%）和 BWYV（3%）。以馬

7、鈴薯 Y病毒屬病毒最多，不同地區(qū)的優(yōu)勢病毒不同。在125份病樣品中，僅9份病樣品中存在一種病毒，其余樣品中均含3種或3種以上病毒，復合侵染檢出率高達93.55%，說明廣東省辣椒病毒種類復合侵染嚴重。
　　4.成功克隆ChiVMV廣東分離物（ChiVMV-GD），該病毒基因組全長為9721 nt（GenBank登錄號：KU987835），包含一個單一開放閱讀框（ORF），長度為9270 nt，編碼的多聚蛋白長度為3089個aa。與海

8、南分離物親緣關(guān)系最近（同源率96.9%），與四川、云南分離物親緣關(guān)系較遠。室內(nèi)人工接種，ChiVMV-GD可侵染辣椒、三生煙、普通煙；在辣椒上的癥狀主要表現(xiàn)為新葉上不規(guī)則暗綠斑駁，深綠部分通常伴有泡狀凸起，葉緣皺縮或卷曲，嚴重時葉片變小畸形、線葉；在三生煙及普通煙上均為枯斑癥狀。
　　5.收集了21種不同辣椒品種，以ChiVMV-GD為毒原，比較不同辣椒品種的抗病性。結(jié)果顯示，14號辣椒品種的抗性最好，發(fā)病指數(shù)為0，其次為13號品