侵染我國(guó)番茄雙生病毒種類鑒定及致病性分析.pdf

1、從浙江、上海、江蘇、山東、河南、廣西采集了26份表現(xiàn)雙生病毒癥狀的番茄樣品，利用雙生病毒簡(jiǎn)并引物PA/PB擴(kuò)增得到約500bp的特異片段，經(jīng)克隆測(cè)序確定所得番茄樣品均感染雙生病毒。在GenBank上比對(duì)分析表明，共檢測(cè)到三種不同的病毒，即番茄黃化曲葉病毒(Tomatoyellowleafcurlvirus，TYLCV)、臺(tái)灣番茄曲葉病毒(TomatoleafcurlTaiwanvirus，ToLCTWV)以及中國(guó)番木瓜曲葉病毒(Papa

2、yaleafcurlChinavirus，PaLCuCNV)。所有分離物都沒(méi)有發(fā)現(xiàn)伴隨有衛(wèi)星DNAβ分子或DNAB組份。 對(duì)浙江、江蘇及山東的TYLCV分離物進(jìn)行了全序列測(cè)定，結(jié)果表明各地分離到的TYLCV分離物具有很高的序列同源性(>98％)，與TYLCV-IL[IL:Reo](X15656)的序列同源性均大于97％。通過(guò)對(duì)GenBank上TYLCV代表分離物全序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析，表明不同分離物之間序列同源性非常高，但是仍

3、可以分為兩大類群。其中侵染我國(guó)番茄的雙生病毒分離物都屬于第一類。 對(duì)廣西及河南的PaLCuCNV分離物進(jìn)行了全序列測(cè)定，全序列長(zhǎng)分別為2748(HeNZM1，F(xiàn)N256260)和2738(GX4，F(xiàn)N297834)nt。它們與PaLCuCNV-[CN:G2](AJ558123)的同源性為94.6％和89.3％，因此被命名為PaLCuCNV-[CN:HeNZM1]和PaLCuCNV-[CN:GX4]。在浙江溫州的番茄樣品中鑒定到了

4、臺(tái)灣番茄曲葉病毒(ToLCTWV)，對(duì)ZJW25分離物進(jìn)行了全序列克隆測(cè)序(2748nt，F(xiàn)N256292)。它與ToLCTWV-[CN:ZJ16]分離物(AM698111)的同源性為99％，因此被命名為T(mén)oLCTWV-[CN:W25]。 構(gòu)建了侵染番茄的三類雙生病毒(TYLCV、PaLCuCNV和ToLCTWV)的侵染性克隆，致病性測(cè)定表明，TYLCV-[CN:SH2]和PaLCuCNV-[CN:HeNZM1]侵染性克隆均可系

5、統(tǒng)侵染本氏煙、三生煙、心葉煙、番茄、矮牽牛并表現(xiàn)明顯癥狀，但不能侵染黃瓜、棉花、茄子及辣椒。此外，發(fā)現(xiàn)TYLCV能夠與異源的DNAβ互作且誘導(dǎo)比病毒單獨(dú)侵染更嚴(yán)重的癥狀。ToLCTWV-[CN:ZJ16]侵染性克隆能侵染番茄并產(chǎn)生葉片卷曲癥狀，但不能侵染本氏煙、三生煙及矮牽牛。當(dāng)ToLCTWV-[CN:ZJ16]與異源的DNAβ共同接種時(shí)，發(fā)現(xiàn)除了在番茄上產(chǎn)生更嚴(yán)重的癥狀外，還能夠侵染本氏煙、三生煙及矮牽牛并產(chǎn)生嚴(yán)重的癥狀。 搜

6、集了20個(gè)抗雙生病毒的番茄抗性材料，利用已經(jīng)報(bào)道的分子標(biāo)記，初步分析這些材料攜帶抗病基因Ty-1，Ty-2和Ty-3。用TYLCV侵染性克隆對(duì)抗性材料進(jìn)行抗性篩選，發(fā)現(xiàn)TYLCV接種后這些抗性材料的抗性表現(xiàn)差異很大，發(fā)病率與病毒含量并不相關(guān)。 用生物信息學(xué)軟件對(duì)侵染我國(guó)番茄的TYLCV、TYLCCNV、ToLCCNV、ToLCTWV、PaLCuCNV、TbCSV和TYLCTHV等雙生病毒的基因組全序列進(jìn)行了分析，選取三個(gè)保守區(qū)段