河南省番茄上雙生病毒的分子鑒定.pdf

1、雙生病毒是一種具有孿生顆粒形態(tài)的單鏈環(huán)狀DNA植物病毒，它會引起許多種重要的經(jīng)濟作物病毒病害。在中國，云南、廣西、廣東等省相繼發(fā)現(xiàn)了多種經(jīng)濟作物上帶有雙生病毒，例如番茄、煙草及番木瓜等。雙生病毒的寄主范圍十分廣泛，突變概率大。為了了解河南地區(qū)侵染番茄的雙生病毒的情況，并為有效開展針對于此病毒的防控研究，我們于2012-2013年間在河南鄭州、洛陽、開封、新鄉(xiāng)、安陽、南陽、信陽、駐馬店、商丘、許昌、長葛和三門峽12個區(qū)市的番茄主產(chǎn)區(qū)采集了

2、59份具有雙生病毒典型癥狀的番茄樣本，并對其進行了病原分子致病性鑒定和變異分析，主要結(jié)果如下：
　　（1）利用粉虱傳雙生病毒簡并引物PA/PB，對采集的59個樣品進行PCR分子檢測，其中36個樣品檢測到約500 bp特異性條帶，檢出率為61％，即36個樣本均受粉虱傳雙生病毒侵染。病毒分離物中DNA-A部分序列和NCBI已登錄的TYLCV分離物序列的同源性均大于99%，判斷河南省內(nèi)侵染番茄的雙生病毒種類為TYLCV。
　　（2

3、）隨機選取9份病毒分離物進行DNA-A全長序列的克隆及序列分析，所檢測的9份分離物的DNA-A全長序列均為2781bp，其序列同源性均大于98.6%，并且TYLCV-Israel Australia分離物DNA-A的序列同源性均大于98.7%，由此可見，河南省內(nèi)侵染番茄的雙生病毒種類為TYLCV。
　?。?）基于DNA-A基因全序列構(gòu)建的系統(tǒng)進化樹可以看出：所檢測樣品中的7份病毒分離物均與其臨近省份的病毒分離物親緣關(guān)系較近，這些地

4、區(qū)病原的可能來源途徑是由其臨近省份經(jīng)帶毒媒介粉虱傳入；但HNXC2和HNXY1兩份分離物與新疆分離物（TYLCV-KSCT016）親緣關(guān)系較近，而二者的地理位置相差較遠，該地區(qū)的病原可能是通過帶毒蔬菜或種苗調(diào)運傳入。
　?。?）在長葛兩樣品中檢測到約為1.3kb的DNAβ特異性條帶。序列測定結(jié)果表明兩分離物的DNAβ序列全長均為1347nts，同源性為100%。兩病毒分離物衛(wèi)星DNAβ與TYLCV-DX2來自越南的一種番茄黃化曲葉