河南省番茄上雙生病毒的分子鑒定.pdf

1、雙生病毒是一種具有孿生顆粒形態(tài)的單鏈環(huán)狀DNA植物病毒，它會(huì)引起許多種重要的經(jīng)濟(jì)作物病毒病害。在中國(guó)，云南、廣西、廣東等省相繼發(fā)現(xiàn)了多種經(jīng)濟(jì)作物上帶有雙生病毒，例如番茄、煙草及番木瓜等。雙生病毒的寄主范圍十分廣泛，突變概率大。為了了解河南地區(qū)侵染番茄的雙生病毒的情況，并為有效開(kāi)展針對(duì)于此病毒的防控研究，我們于2012-2013年間在河南鄭州、洛陽(yáng)、開(kāi)封、新鄉(xiāng)、安陽(yáng)、南陽(yáng)、信陽(yáng)、駐馬店、商丘、許昌、長(zhǎng)葛和三門峽12個(gè)區(qū)市的番茄主產(chǎn)區(qū)采集了

2、59份具有雙生病毒典型癥狀的番茄樣本，并對(duì)其進(jìn)行了病原分子致病性鑒定和變異分析，主要結(jié)果如下：
　?。?）利用粉虱傳雙生病毒簡(jiǎn)并引物PA/PB，對(duì)采集的59個(gè)樣品進(jìn)行PCR分子檢測(cè)，其中36個(gè)樣品檢測(cè)到約500 bp特異性條帶，檢出率為61％，即36個(gè)樣本均受粉虱傳雙生病毒侵染。病毒分離物中DNA-A部分序列和NCBI已登錄的TYLCV分離物序列的同源性均大于99%，判斷河南省內(nèi)侵染番茄的雙生病毒種類為TYLCV。
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3、）隨機(jī)選取9份病毒分離物進(jìn)行DNA-A全長(zhǎng)序列的克隆及序列分析，所檢測(cè)的9份分離物的DNA-A全長(zhǎng)序列均為2781bp，其序列同源性均大于98.6%，并且TYLCV-Israel Australia分離物DNA-A的序列同源性均大于98.7%，由此可見(jiàn)，河南省內(nèi)侵染番茄的雙生病毒種類為TYLCV。
　?。?）基于DNA-A基因全序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)可以看出：所檢測(cè)樣品中的7份病毒分離物均與其臨近省份的病毒分離物親緣關(guān)系較近，這些地

4、區(qū)病原的可能來(lái)源途徑是由其臨近省份經(jīng)帶毒媒介粉虱傳入；但HNXC2和HNXY1兩份分離物與新疆分離物（TYLCV-KSCT016）親緣關(guān)系較近，而二者的地理位置相差較遠(yuǎn)，該地區(qū)的病原可能是通過(guò)帶毒蔬菜或種苗調(diào)運(yùn)傳入。
　?。?）在長(zhǎng)葛兩樣品中檢測(cè)到約為1.3kb的DNAβ特異性條帶。序列測(cè)定結(jié)果表明兩分離物的DNAβ序列全長(zhǎng)均為1347nts，同源性為100%。兩病毒分離物衛(wèi)星DNAβ與TYLCV-DX2來(lái)自越南的一種番茄黃化曲葉