31206.家蠶表皮高豐度表達(dá)基因bmgcp2的克隆、表達(dá)及分析

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶表皮高豐度表達(dá)基因BmGCP2的克隆、表達(dá)及分析姓名：李智申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：周澤揚(yáng)20090501兩南大學(xué)碩十學(xué)位論文將BmGCP2P(不含信號(hào)肽序列)基因亞克隆到pGEX4T1表達(dá)載體，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，并將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21表達(dá)菌株。通過IPTG誘導(dǎo)重組菌BmGCP2P／pGEX4T一1表達(dá)蛋白，得到一個(gè)約53kD的重組蛋白，其中標(biāo)簽蛋白約26kD，目的蛋白約27kD，與

2、預(yù)測(cè)分子量相符合。通過表達(dá)條件的優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)最佳的誘導(dǎo)條件為37℃、02mmol／LIPTG誘導(dǎo)4h。蛋白組分鑒定表明，誘導(dǎo)表達(dá)的重組蛋白以包涵體的形式表達(dá)。4、BmGCP2蛋白的表達(dá)特性研究利用親和柱純化BmGCP2P原核表達(dá)蛋白，并制備抗體。Westernblotting分析家蠶BmGCP2蛋白在5齡3天各組織中的表達(dá)情況，結(jié)果表明，BmGCP2蛋白只在家蠶表皮表達(dá)，這與曰肌GCP2基因mRNA水平的表達(dá)情況一致。綜上所述，本研究克隆