家蠶Elav基因的克隆分析和時(shí)空表達(dá)研究.pdf

1、胚胎致死異常視覺(jué)Elav基因，是果蠅神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和功能異常的致死基因。根據(jù)果蠅ELAV蛋白質(zhì)的氨基酸序列，利用家蠶EST數(shù)據(jù)庫(kù)，電子克隆出一條Elav基因的同源基因Bm-Elav。進(jìn)一步以家蠶大造品種L5-3d的絲腺RNA為模板，RT-PCR方法得到Bm-Elav基因的cDNA序列，其ORF框?yàn)?07 bp，堿基序列與預(yù)測(cè)序列一致。通過(guò)比較分析NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中家蠶的全基因組數(shù)據(jù)，獲得了家蠶Bm-Elav的基因組DNA序列，該序列僅包括一

2、個(gè)外顯子而沒(méi)有內(nèi)含子。推測(cè)的Bm-Elav基因翻譯蛋白質(zhì)有268個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中有3個(gè)RRM基序，屬于RRM RNA結(jié)合蛋白家族。 將Bm-Elav基因片段克隆到表達(dá)載體pET-28a(+)，構(gòu)建大腸桿菌融合表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)．Bm-Elav；將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL<,21>，IPTG誘導(dǎo)，成功表達(dá)了家蠶Bm-Elav基因的融合蛋白，為研究Bm-Elav功能奠定了基礎(chǔ)。 為了探討B(tài)m-Elav基因的功

3、能，調(diào)查了Bm-Elav基因的時(shí)空表達(dá)。以A3基因?yàn)閮?nèi)標(biāo)，根據(jù)構(gòu)建的Bm-Elav基因優(yōu)化半定量RT-PCR方法，調(diào)查了家蠶產(chǎn)下后0.5 h、30 h及活化時(shí)期的卵；5齡3 d和6 d、吐絲1 d、蛹期3 d和6 d時(shí)期的卵巢和脂肪體；5齡3 d和6 d、吐絲1 d時(shí)期的中腸、絲腺和造血器官組織Bm-Elav基因的差異性表達(dá)。結(jié)果顯示，家蠶Bm-Elav基因在幼蟲、蛹期的表達(dá)沒(méi)有時(shí)期、組織顯著差異性，而在活化卵中沒(méi)有表達(dá)。推測(cè)家蠶Bm-