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文檔簡介
1、目的:從豬囊尾蚴cDNA中擴(kuò)增出GP50編碼基因,亞克隆至真核表達(dá)載體,利用所得的重組蛋白,為建立一種靈敏檢測豬囊尾蚴感染的實驗方法作準(zhǔn)備.方法:設(shè)計并合成引物,從豬囊尾蚴cDNA文庫中PCR擴(kuò)增GP50編碼基因,通過與線性克隆載體pGEM-T連接,經(jīng)酶切和PCR鑒定及DNA測序證實后,將目的基因亞克隆入雙表達(dá)載體pBK-CMV,將獲得的pBK-CMV-GP50陽性重組子轉(zhuǎn)化宿主菌E.coli BL21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),Western
2、 blot鑒定.結(jié)果:PCR法擴(kuò)增出了一897bp左右的DNA片斷,將重組質(zhì)粒pGEM-T-GP50、pBK-CMV-GP50分別作BamH Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切,均能得到一個大小與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物一致的插入片斷,對插入片斷的測序結(jié)果表明,GP50具有一個長度為897bp的完整開放閱讀框(ORF),編碼298個氨基酸,理論分子量33kDa,與GenBank收錄(編號為AY212945)的豬囊尾蚴GP50基因具有高度的同源性(99％).表明
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