抗豬囊尾蚴特異IgG4重組抗原的制備與鑒定.pdf

1、豬囊尾蚴病(以下簡(jiǎn)稱囊蟲病)是人獸共患寄生蟲病,病原體為豬帶絳蟲(Taenia solium)的幼蟲豬囊尾蚴。囊蟲病的危害程度,因寄生部位和數(shù)量而有所不同,其中以腦囊蟲病危害最大。囊尾蚴病的有效診斷是控制該病的關(guān)鍵。然而,作為一種寄生于人、豬等脊椎動(dòng)物體內(nèi)的扁形動(dòng)物門寄生蟲,其抗原成分復(fù)雜,且與其他帶科寄生蟲抗原間存在廣泛交叉性,因此,囊尾蚴有效診斷抗原的篩選工作難度大、任務(wù)繁重。從組織結(jié)構(gòu)上來說,囊尾蚴抗原包括囊液抗原、囊壁抗原和頭節(jié)

2、抗原,且這些抗原隨囊尾蚴的發(fā)育階段不同而呈現(xiàn)出變化。另外,囊尾蚴在宿主體內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育過程中還會(huì)排泄分泌到其體外一些抗原成分,即排泄分泌抗原(excretary-secretary antigen,ES-Ag)。盡管如此,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,囊尾蚴重組診斷抗原的研究仍是免疫診斷的熱點(diǎn)。與囊尾蚴囊壁、頭節(jié)相比,囊尾蚴囊液的糖蛋白和脂蛋白含量豐富,且其抗原特異性較高,抗原成分的pH值主要位于堿性區(qū)。另外,研究顯示當(dāng)人體感染豬囊尾蚴后,幾乎所有

3、患者血清中特異IgG4顯著性升高,其含量約占總反應(yīng)IgG抗體50％以上,因此檢測(cè)囊蟲病患者血清特異IgG4具有較好的敏感性,特別是IgG4為短程抗體,當(dāng)患者體內(nèi)的囊尾蚴被殺滅后,特異IgG4會(huì)較快的降低或消失,客服了檢測(cè)總IgG不能進(jìn)行療效考核的不足。本實(shí)驗(yàn)利用收集到的囊尾蚴囊液抗原進(jìn)行雙向電泳和免疫印記,發(fā)現(xiàn)與IgG4抗體結(jié)合力較強(qiáng)的蛋白以堿性居多,以小分子量蛋白為主。經(jīng)抗原篩選出51個(gè)抗原點(diǎn),對(duì)抗原點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析,找出24個(gè)陽(yáng)性點(diǎn)。

4、24個(gè)陽(yáng)性點(diǎn)與12種囊蟲蛋白密切相關(guān),每個(gè)陽(yáng)性點(diǎn)都有4到5個(gè)相關(guān)蛋白(分值大于等于39),其中最為密切相關(guān)的蛋白有4種。分別為Secreted antigen Ts883(16/24),Secreted antigen Ts8B2(18/24),Sequence3 from patent US6589752(15/24)和Cysticercosis10kDa antigen(16/24)。選取其中排泄分泌抗原Ts8B3基因,并將成熟肽序