西瓜嗜酸菌趨化性測(cè)定及趨化基因cheA和cheY功能研究.pdf

1、瓜類細(xì)菌性果斑病(Bacterial Fruit Blotch，簡(jiǎn)稱BFB)是世界范圍的檢疫性細(xì)菌病害，主要為害西瓜、甜瓜等葫蘆科作物，造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli，Schaad et al，2008)是其病原菌，有研究表明病原細(xì)菌在寄主表面的定殖能力與其致病能力關(guān)系密切，而病原細(xì)菌的趨化能力是決定定殖能力的關(guān)鍵因素之一。本研究主要圍繞西瓜嗜酸菌的趨化性測(cè)定及其趨化基因的功能展開，主要結(jié)果如下:

2、
　　1、初步測(cè)定西瓜嗜酸菌Ac-5菌株的趨化性
　　利用毛細(xì)管法測(cè)定碳源、氨基酸、有機(jī)酸等對(duì)西瓜嗜酸菌趨化性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):麥芽糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖和半乳糖顯著促進(jìn)西瓜嗜酸菌的趨化性;L-亮氨酸、L-異亮氨酸、L-色氨酸、L-纈氨酸、L-脯氨酸、L-谷氨酸和L-谷氨酰胺顯著促進(jìn)西瓜嗜酸菌的趨化性，而L-蛋氨酸顯著抑制其趨化性;檸檬酸和蘋果酸顯著促進(jìn)西瓜嗜酸菌的趨化性;氯化鈉、硫酸鎂等對(duì)西瓜嗜酸菌的趨化性無(wú)顯著影響。

3、r>　　2、Ac-5菌株趨化基因cheA和cheY的生物信息學(xué)分析
　　登錄NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)西瓜嗜酸菌全基因序列查找cheA和cheY基因的相關(guān)信息。cheA和cheY基因分別編碼CheA和CheY蛋白。CheA和CheY蛋白均存在多個(gè)疏水性氨基酸區(qū)域;CheA蛋白是一種跨膜蛋白，在600-700氨基酸處（即CheW結(jié)合區(qū)域）有跨膜結(jié)構(gòu)，CheY蛋白不存在跨膜結(jié)構(gòu)，是一種膜內(nèi)蛋白，用于接收CheA蛋白的信號(hào);西瓜嗜酸菌CheA蛋白與

4、青枯菌的CheA蛋白親緣關(guān)系最近，和熒光假單胞菌的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。
　　3、Ac-5菌株趨化基因cheA和che Y3的功能研究
　　構(gòu)建ΔcheA和ΔcheY3基因缺失突變株以及CcheA互補(bǔ)菌株，并進(jìn)行表型分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn):ΔcheA和ΔcheY3基因缺失突變株與野生型菌Ac-5相比，趨化及運(yùn)動(dòng)能力下降;在種子表面的定殖能力下降;病株病情指數(shù)先下降后恢復(fù)野生型菌株Ac-5水平;生物膜形成能力增強(qiáng);引起非寄主煙草的過敏性反應(yīng)。