西瓜食酸菌抗銅性相關(guān)基因cusB的功能分析.pdf

1、西瓜食酸菌(Acidovorax citrulli)侵染葫蘆科植物會(huì)使其產(chǎn)生一種破壞力極大的瓜類細(xì)菌性果斑病(bacterial fruit blotch，BFB)，該病害已在世界各國迅速傳播，對當(dāng)?shù)氐奈魈鸸袭a(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前銅素類殺菌劑廣泛應(yīng)用于防治瓜類細(xì)菌性果斑病，但過度使用，使得西瓜食酸菌抗銅能力逐漸增強(qiáng)，因此，研究該病菌的抗銅機(jī)理顯得尤為突出。
　　本研究首先對西瓜食酸菌RND（耐藥結(jié)節(jié)細(xì)胞分化）家族外排轉(zhuǎn)運(yùn)體的

2、膜融合蛋白基因cusB進(jìn)行生物信息學(xué)分析，然后利用實(shí)驗(yàn)室保存的cusB基因缺失的突變體△cusB，通過比較野生型和突變體以及功能互補(bǔ)菌株在抗銅性、胞外分泌物檢測、致病性及過敏性壞死反應(yīng)等相關(guān)的生物學(xué)性狀之間的差異分析，研究cusB基因的功能，主要獲得以下結(jié)論:
　　首先，cusB基因的生物信息學(xué)分析，cusB基因大小為1185bp，編碼具有394個(gè)氨基酸殘基的CusB蛋白亞基，主要作為一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)體參與RND外排轉(zhuǎn)運(yùn)體的正常工作，西瓜

3、食酸菌的CusB蛋白與大腸桿菌的CusB蛋白在理化性質(zhì)以及親緣關(guān)系上較近，預(yù)測該蛋白在1-30氨基酸殘基處疏水性較高，且存在一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，預(yù)測發(fā)現(xiàn)存在多個(gè)磷酸化位點(diǎn)，分泌蛋白的亞細(xì)胞定位于周質(zhì)空間，其二級結(jié)構(gòu)存在α-螺旋、β-折疊、無規(guī)則卷曲。
　　其次，cusB基因缺失突變體與野生型和功能互補(bǔ)菌株表型測定比較本研究利用雙親雜交的方法構(gòu)建功能互補(bǔ)菌株，與野生型相比，突變體在抗銅性，胞外多糖分泌，生物膜形成中顯著降低，而在功能互補(bǔ)