西瓜嗜酸菌鞭毛突變體的篩選及功能研究.pdf

1、本研究利用三親雜交技術(shù)將帶有卡那霉素抗性的Tn5轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)到果斑病菌A13和3號(hào)菌株中，分別獲得菌株A13轉(zhuǎn)化克隆子1036個(gè)，菌株3轉(zhuǎn)化741個(gè)，共計(jì)1777個(gè)克隆子，并分別隨機(jī)挑選60個(gè)進(jìn)行果斑病菌和卡那基因驗(yàn)證，所驗(yàn)證的克隆子均能擴(kuò)增到一條條帶（果斑病菌360bp，卡那基因586bp）說(shuō)明所獲得克隆子均為果斑病病菌，而且均帶有 Tn5轉(zhuǎn)座子，從而成功構(gòu)建了果斑病菌菌株A13和3的突變體庫(kù)。
　　利用平板游動(dòng)性檢測(cè)法對(duì)獲得的17

2、77克隆子進(jìn)行篩選，結(jié)果表明從1777個(gè)突變子中篩選得到45株游動(dòng)性出現(xiàn)不同程度減弱的突變株，其中從A13突變株中篩選到游動(dòng)性減弱的有30株，而明顯減弱的有3株；從菌株3號(hào)克隆子中篩選到游動(dòng)性減弱的菌株有15株；對(duì)這45株游動(dòng)性減弱的突變株進(jìn)行致病性測(cè)定，結(jié)果表明喪失致病性的菌株有5株，致病性減弱的有5株，致病性沒(méi)有發(fā)生變化的菌株有35株。本研究從上述篩選結(jié)果中選出3株（菌株438、561和567）游動(dòng)性顯著減弱的菌株進(jìn)行鞭毛的形態(tài)特征

3、、致病性、過(guò)敏性反應(yīng)、生長(zhǎng)能力、群體感應(yīng)信號(hào)、生物膜、胞外多糖等研究，結(jié)果如下：
　?。?）電鏡觀察結(jié)果表明菌株438的鞭毛較野生型菌株短、菌株561的鞭毛完全喪失，而菌株567的鞭毛較野生菌株細(xì)；（2）致病性測(cè)定發(fā)現(xiàn)鞭毛變短和缺失的突變體（438和561）喪失了致病性，而鞭毛變細(xì)的突變體（567）致病性與野生菌株相同；（3）過(guò)敏性測(cè)定結(jié)果表明鞭毛變短和缺失的突變體不能激發(fā)煙草的過(guò)敏性反應(yīng)，而鞭毛細(xì)的突變體與野生型菌株相同，可以激