蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）B905趨化性cheA基因的克隆及其定殖相關(guān)性.pdf

1、植物內(nèi)生細(xì)菌是指能定殖在健康植物組織內(nèi)，并與寄主植物建立和諧聯(lián)合關(guān)系的一類細(xì)菌。諸多研究結(jié)果表明，部分植物內(nèi)生細(xì)菌對植物是有益的，因此，這部分植物內(nèi)生細(xì)菌的研究已成為國內(nèi)外研究的熱點之一。 蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)B905是本實驗室從小麥根部分離的一株內(nèi)生增產(chǎn)防病細(xì)菌。它可以在小麥的根圍和根內(nèi)定殖，但其定殖機理目前尚不清楚。本研究從該菌的趨化性cheA基因入手，克隆該基因并采用插入突變方法獲得突變菌株，再比

2、較突變株與野生菌株之間的定殖能力的差異，為明確影響細(xì)菌定殖的因素做一些初步探索。 從NCBI上獲得蠟樣芽孢桿菌ATCC 10987的cheA基因序列，通過DNAMAN軟件設(shè)計引物，以蠟樣芽孢桿菌B905的基因組DNA為模板，擴增獲得了一條大小為2019bp的片段，測序結(jié)果表明該片段為B905菌株cheA基因。根據(jù)測序后的cheA基因序列設(shè)計用于同源重組的中部片段引物，擴增獲得大小為1200bp的片段，并連接到pHSG299載體上

3、，電擊轉(zhuǎn)化B905，利用同源重組原理，獲得了一個cheA基因的插入突變體。用GFP標(biāo)記的野生型B905和突變體以浸種法和灌根法分別接種小麥，12天后取小麥的根部，分別測定野生型菌株和突變體在小麥根部的定殖量。激光共聚焦顯微鏡觀察和生物學(xué)測定結(jié)果表明，突變體在小麥根部的定殖量明顯少于野生菌株在小麥根部的定殖量。其中，浸種處理后，菌株在小麥根部的定殖量明顯高于灌根處理；當(dāng)接種量下降時，菌株在小麥根部的定殖量也隨之下降。本試驗僅只是得到了一些