2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、本研究從廢棄淀粉堆中分離篩選到一株產(chǎn)低溫淀粉酶的優(yōu)良菌株GXBC-1。對(duì)GXBC-1淀粉酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)的初步研究,其最適溫度為30-40℃,在0℃仍然具有酶活,當(dāng)溫度高于50℃時(shí)酶活迅速降低,符合低溫淀粉酶的特征;最適pH為7.0。通過(guò)對(duì)其進(jìn)行菌落形態(tài)和理化性質(zhì)的觀察與測(cè)定,加之結(jié)合對(duì)其16SrRNA序列比對(duì)分析,初步鑒定為Bacillus cereus屬。
　　 通過(guò)同源淀粉酶序列比對(duì),設(shè)計(jì)引物利用PCR技術(shù)從Bacillus

2、 cereusGXBC-1中擴(kuò)增出一段大小為1.764kb的低溫淀粉酶基因片段。將其克隆到大腸桿菌JM109(DE3)中進(jìn)行高效表達(dá)。通過(guò)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè),在64kD處有明顯表達(dá)條帶,與預(yù)期結(jié)果相符。通過(guò)鎳柱純化后,對(duì)GXBC-1重組酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了測(cè)定。其最適溫度為35℃,最適pH為7.0,Km值為0.72 mg/mL,比活力為161.2 U/mg,經(jīng)HPLC檢測(cè)其主要產(chǎn)物為葡萄糖和麥芽糖。
　　 本研究還對(duì)G

3、XBC-1低溫淀粉酶基因進(jìn)行了定點(diǎn)飽和突變和結(jié)構(gòu)域切換,以期使GXBC-1低溫淀粉酶的酶活提高或產(chǎn)物發(fā)生改變。通過(guò)同源建模和ProSa2003能量軟件分析,確定了拐點(diǎn)附近的298位、活性位點(diǎn)358位以及活性位點(diǎn)附近的426位氨基酸作為定點(diǎn)飽和突變位點(diǎn)。通過(guò)反向PCR和突變體庫(kù)的構(gòu)建,從中篩選出四個(gè)突變酶K298L、E358N、T426S和T426V。將其酶學(xué)性質(zhì)與原始酶進(jìn)行比較分析,突變酶E358N最適溫度較野生酶低了5℃,而T426V

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