異淀粉酶基因的克隆表達(dá)以及可降解淀粉釀酒酵母工程菌的構(gòu)建.pdf

1、為了提高淀粉的利用率,本研究采用PCR方法克隆了來源于Pseudomonasamyloderamosa SB-15的異淀粉酶基因(iso),重組進(jìn)克隆載體pBluescript M13+進(jìn)行DNA序列分析,再將iso基因克隆至含MFa-1啟動子、信號肽和PGK終止序列的質(zhì)粒YepMT04中獲得重組質(zhì)粒pISOMT04,然后從質(zhì)粒上切下含"MFa1啟動子-MFa1信號肽-iso-PGK終止序列"的異淀粉酶基因表達(dá)盒,將此表達(dá)盒取代YIp4

2、RGAn的糖化酶基因表達(dá)盒,構(gòu)建含有異淀粉酶基因的單基因整合型表達(dá)載體YIpISO;同時將此表達(dá)盒克隆至含糖化酶基因的YIp4RGAn中構(gòu)建含有糖化酶基因與異淀粉酶基因的雙基因整合型表達(dá)載體YIpGISO.用電穿孔法將YIpGISO及YIpISO分別轉(zhuǎn)化釀酒酵母JL108,經(jīng)PCR鑒定和酶活分析篩選出整合了iso基因并且具有異淀粉酶活性的轉(zhuǎn)化子JL108(YIpISO)及JL108(YIpGISO),并證明這兩株工程菌經(jīng)過150世代后其

3、酶活力基本不變,表明它們是穩(wěn)定的.對這兩株工程菌的淀粉水解能力和酒精生產(chǎn)能力進(jìn)行了分析,并用含異淀粉酶基因的工程菌JL108(YIpISO)及含糖化酶基因的工程菌JL108(YIp4RGAn)進(jìn)行雙菌混合發(fā)酵,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其淀粉水解能力與產(chǎn)酒率均比含有異淀粉酶與糖化酶雙基因的工程菌JL108(YIpGISO)及含糖化酶單基因的工程菌JL108(YIp4RGAn)稍高,說明引入異淀粉酶基因?qū)μ岣叩矸鄣睦寐屎彤a(chǎn)酒率有促進(jìn)作用.此外我們還摸索了