生產(chǎn)可降解塑料的基因工程菌的構(gòu)建.pdf

1、聚β-羥基烷酸酯(Polyhydroxyalkanoate,PHA)是一種由微生物合成的聚酯,由于具有生物可降解性、生物相容性、光學(xué)性、壓電性、氣體相隔性等許多優(yōu)良性能,而有可能在眾多領(lǐng)域,如生物降解性包裝材料、組織工程材料和緩釋材料等方面得到廣泛應(yīng)用,因此正日益引起了科研領(lǐng)域及工業(yè)界的廣泛興趣。 本文用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增并克隆了真養(yǎng)產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes eutrophus)中合成聚β-羥基丁酸酯(poly-β-hy

2、droxybutyrate,PHB)的三個(gè)關(guān)鍵酶--β-酮硫裂解酶基因phbA、依賴(lài)NADPH的乙酰乙酰CoA還原酶基因(phbB)和PHB合成酶基因(phbC),成功構(gòu)建了含有phbA的表達(dá)載體并轉(zhuǎn)入巨大芽孢桿菌中進(jìn)行表達(dá),旨在提高PHB產(chǎn)量降低成本。論文取得了如下研究成果： (1)從GeneBank中查詢(xún)了關(guān)于真養(yǎng)產(chǎn)堿桿菌中phbA、phbB、phbC基因的序列,設(shè)計(jì)了PCR引物,以真養(yǎng)產(chǎn)堿桿菌中提取的總DNA為模板,采用P

3、CR擴(kuò)增法克隆出phbA、phbB和phbC三段基因。 (2)選用大腸桿菌-芽孢桿菌穿梭質(zhì)粒,成功構(gòu)建了含有phbA的表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)入巨大芽孢桿菌中進(jìn)行表達(dá)。 (3)用菌落直接PCR法鑒定了重組質(zhì)粒。 (4)搖瓶發(fā)酵研究表明,重組巨大芽孢桿菌可以利用葡萄糖、果糖、可溶性淀粉和丁酸等多種碳源合成PHB,且細(xì)胞干重與PHB百分率都有了大幅度提高。重組巨大芽孢桿菌可以利用可溶性淀粉等廉價(jià)底物,進(jìn)一步降低PHB的生產(chǎn)成本