蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)對草甘膦降解作用的初步研究.pdf

1、草甘膦是一種非選擇性的芽后莖葉除草劑,廣泛用于防除雙子葉、禾本科雜草等。近年來,草甘膦由于優(yōu)良的除草效果及抗草甘膦作物的種植,在我國已得到廣泛的推廣和使用。目前,國內(nèi)草甘膦轉(zhuǎn)基因作物的研究成為了熱點,而草甘膦降解菌株為轉(zhuǎn)基因作物研究提供了微生物資源。本試驗通過富集培養(yǎng)的方法從土壤和廢水中分離篩選出120株降解菌,對其中降解能力較強的CW-1菌株進行了深入研究,主要研究結(jié)果如下:
　　 1.利用富集培養(yǎng)、馴化技術(shù)從草甘膦廢水和長期

2、施用草甘膦的土壤中分離得到了120株能降解草甘膦的微生物,包括20株真菌和100株細菌。利用紫外分光光度法和高效液相色譜柱后衍生法測定了菌株對草甘膦的降解率。結(jié)果發(fā)現(xiàn):真菌菌株WF-11、細菌菌株CW-1和CW-72降解草甘膦能力較強,對草甘膦的降解率分別為52.5％、60.2%和56.3%。
　　 2.通過生物學(xué)、生理生化特征及16S rDNA序列分析的方法對CW-1菌株進行了鑒定,結(jié)果表明CW-1菌株為蠟樣芽孢桿菌(Baci

3、llus cereus)。研究了CW-1菌株對草甘膦的降解特性,明確了CW-1菌株降解草甘膦的最適條件:草甘膦濃度1500 mg·L-1;培養(yǎng)時問5 d;溫度30℃;pn值8.0;CW-1菌株接種量4 mL(OD600=1);葡萄糖濃度5 g·L-1。在上述適宜條件下,CW-1菌株對草甘膦的降解率為65.3%。草甘膦的耐受實驗表明,在草甘膦培養(yǎng)基2中,草甘膦濃度在16000～32000 mg·L-1時,該菌株生長迅速;在草甘膦濃度為32

4、000 mg·L-1時生長量達到最高;草甘膦濃度為48000mg·L-1時生長緩慢。
　　 3.抗藥性實驗表明,CW-1菌株在含有氨芐青霉素、鹽酸四環(huán)素的平板培養(yǎng)基上能生長;在含有卡那霉素和氯霉素的平板培養(yǎng)基上不能生長。將從CW-1菌株中擴增得到的部分aroA基因與己報道蠟樣芽孢桿菌aroA基因進行比對發(fā)現(xiàn):CW-1的aroA基因發(fā)生了多位點突變。將CW-1菌株中的小質(zhì)粒和aroA基因分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌中,轉(zhuǎn)化菌株在含有48000