芽孢桿菌A-47鞭毛蛋白基因的克隆及其與定殖相關(guān)性初探.pdf

1、植物內(nèi)生細(xì)菌是指能定殖在健康植物組織內(nèi)，并與寄主植物建立和諧聯(lián)合關(guān)系的一類微生物。諸多研究結(jié)果表明，部分植物內(nèi)生細(xì)菌對(duì)植物是有益的，因此，這部分植物內(nèi)生細(xì)菌的研究已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。@@蠟樣芽孢桿菌(bacilluscereus)A-47是本實(shí)驗(yàn)室從小麥根部分離的一株內(nèi)生增產(chǎn)細(xì)菌。它可以在小麥的根部定殖，但其定殖機(jī)理目前尚不清楚，本研究從該菌的鞭毛蛋白基因入手，先克隆基因，然后采用插入突變方法獲得突變菌株，再比較突變株與野生菌株

2、之間的性狀差異，為明確細(xì)菌的定殖因子做一些初步探索。@@由鞭毛蛋白基因的同源序列設(shè)計(jì)引物，以蠟樣芽孢桿菌A-47的基因組DNA為模板，擴(kuò)增獲得了兩個(gè)鞭毛蛋白基因，分別命名為flaA和flaB；選取flaA基因中780bp的片段，連接到自殺載體pHSG299上，電擊轉(zhuǎn)化A-47，利用同源重組原理，獲得了一個(gè)鞭毛蛋白基因插入突變體，電鏡觀察發(fā)現(xiàn)突變體不能再產(chǎn)生鞭毛；用突變體和雙抗標(biāo)記的A-47(野生型)以浸種法分別接種小麥，14天后取6株小

3、麥的根部，分別測(cè)定野生型菌株和突變體在小麥根部表面的定殖量，測(cè)定結(jié)果分別為8.2和7.4(Log10ofcfu/g根鮮重)；同時(shí)取12株小麥分別測(cè)定野生型菌株和突變體在小麥根內(nèi)的定殖量，測(cè)定結(jié)果分別是6.1和5.0(Log10ofcfu/g根鮮重)；研究結(jié)果還突變體在根內(nèi)部的定殖量可能隨根部表面定殖量的下降而減少，但本試驗(yàn)還只是得到了一些初步結(jié)果，至于鞭毛是否在內(nèi)生定殖階段發(fā)揮多大作用尚不明確，要徹底解析鞭毛與定殖的關(guān)系，還需要大量的后