細菌鞭毛蛋白在IBD發(fā)病中的作用機制研究.pdf

1、背景：炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)的發(fā)病率成逐年上升趨勢,確切病理機制不明?？赡苁艿侥c道菌群、免疫介導(dǎo)的組織損傷和遺傳易感性等多種因素的綜合影響。許多研究顯示,細菌是IBD的促發(fā)因素。鞭毛蛋白(CBir1)作為鞭毛細菌抗原的重要成分,也是細菌的毒性成分,現(xiàn)有關(guān)細菌鞭毛蛋白與IBD關(guān)系的研究較少。
　　 目的：通過建立IBD動物模型,觀察小鼠疾病活動情況,檢測其血清及組織中CBir1、

2、TLR5和肥大細胞類胰蛋白酶β2(Mast cell tryptase,MCT)、組胺的表達水平,并對模型組進行干預(yù),研究CBir1在IBD致病中的作用,了解它對IBD診斷和炎癥活動程度評估的重要意義,以探討IBD發(fā)病機制。
　　 方法：SPF級雄性BALb/c小鼠隨機分為6組,每組12只。①正常對照組:野生型BALb/c小鼠,自由飲食。②生理鹽水組:禁食24h,自由飲水,100μl生理鹽水灌腸后自由飲食,于第8天,第15天重復(fù)

3、此操作。③50％乙醇組:將50%乙醇溶液100μl灌腸。④TNBS+50%乙醇組:第1天用2.0mgTNBS/50%乙醇100μl灌腸,第8天用2.5mgTNBS/50%乙醇100μl灌腸,第15天用3.0mgTNBS/50%乙醇100μl灌腸。⑤酮替芬+TNBS+50%乙醇組:將0.5mg酮替芬溶于生理鹽水100μl,于灌腸前30min每只小鼠腹腔注射100μl酮替芬溶液。⑥LPS+OVA+TNBS+50%乙醇組:將LPS10μg+O

4、VA20μg溶于生理鹽水100μl于第7、9、12、15天對每只小鼠腹腔注射100μl此溶液,OVA50μg溶于生理鹽水100μl于第18、19、20、21天進行腹腔注射100μl此溶液。對各組小鼠進行DAI評分,于第22天全部剪頭處死,ELISA檢測血清中抗-CBir1、MCT、組胺濃度,結(jié)腸組織HE染色后進行HI評分,免疫組化方法檢測結(jié)腸組織內(nèi)CBir1、TLR5和MCT的表達。實驗數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理,計量數(shù)據(jù)采用均

5、數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示,所有數(shù)據(jù)用Levene檢驗方法進行方差齊性檢驗,各組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析(ANOVA),對方差分析有意義者再采用LSD-t檢驗法進行兩兩比較,檢驗水準(zhǔn)為α=0.05,P＜0.05時被認為具有統(tǒng)計學(xué)意義。采用Pearson積矩相關(guān)系數(shù)來描述變量之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：⑴正常對照組、生理鹽水組的結(jié)腸粘膜上皮完整,腺體排列規(guī)則,幾乎無炎癥細胞浸潤。50%乙醇組粘膜層分布少量淋巴細胞。TNBS+50%乙醇

6、組上皮細胞破碎,杯狀細胞減少,粘膜層、肌層內(nèi)大量炎癥細胞浸潤,粘膜上皮見小片狀壞死,并于粘膜下層及固有肌層小血管增生。酮替芬+TNBS+50%乙醇組粘膜層、肌層有少量的淋巴細胞浸潤。LPS+OVA+TNBS+50%乙醇組正常腺體結(jié)構(gòu)消失,炎癥累及腸壁全層,固有基層增厚。且腸粘膜組織學(xué)損傷程度越深,CBir1(或抗-CBir1)、MCT、(或)TLR5和(或)組胺在腸粘膜組織中和(或)血清中的表達越高。⑵TNBS+50%乙醇組、酮替芬+T

7、NBS+50%乙醇組、LPS+OVA+TNBS+50%乙醇組的DAI評分、HI評分、CBir1(或抗-CBir1)、MCT、(或)TLR5和(或)組胺在腸粘膜組織中和(或)血清中的表達明顯高于正常對照組(P＜0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;酮替芬+TNBS+50%乙醇組低于TNBS+50%乙醇組(P＜0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;TNBS+50%乙醇組低于LPS+OVA+TNBS+50%乙醇組(P＜0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;生理鹽水組

8、、50%乙醇組與正常對照組比較(P＞0.05)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。⑶IBD模型組血清抗-CBir1與MCT濃度呈正相關(guān)(r1=0.648,P1＜0.01),血清抗-CBir1與組胺濃度亦呈正相關(guān)(r2=0.751,P2＜0.01)。
　　 結(jié)論：①CBir1參與了實驗性IBD的致病過程；②CBir1可通過激活肥大細胞,被激活的肥大細胞釋放化學(xué)介質(zhì)從而導(dǎo)致腸道炎癥反應(yīng)的發(fā)生；③CBir1、TLR5、MCT和組胺的表達量與IBD模型結(jié)